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2つの均質なアッセイシステムが組み合わされて、新しい細胞ベースの機能アッセイを提供しました。アッセイは、β（2）アドレナリン受容体へのリガンド結合を識別するために使用できますが、下流の応答も同じアッセイで決定できます。クエンチング共鳴エネルギー移動（QRET）とDiscoverX Pathhunterアッセイ形式の両方により、無傷の細胞を使用することができます。均一なQRET技術は、時間分解された発光の非特異的な消光に基づいた単一の盲検アプローチであり、アゴニストと拮抗薬の受容体結合測定を可能にします。市販のパスハンターアッセイは、化学発光信号に基づいて検出できる酵素フラグメント補体に基づいています。Pathhunterテクノロジーでは、酵素補完は、アゴニスト誘発受容体の活性化のすぐ下流に記録されます。新しいマルチパラメトリック検出技術は、これら2つのアッセイ方法を組み合わせて、アゴニストと受容体への拮抗薬結合の同定、およびアゴニスト誘発反応を可能にします。QRETおよびPATHHUNTERメソッドを使用して、β（2）アドレナリン受容体リガンド（エピネフリン、テルブタリン、メタプロテレノール、サルメテロール、プロノロール、アルプロノロール、ビソプロロール、ICI 118,551、およびブチンドロール）のパネルを使用して、アッセイのパフォーマンスを実証しました。テスト済みのリガンドの信号対バックグラウンド比は、それぞれQRETとPATHHUNTERで5から11、6〜18の範囲でした。組み合わせた均一なアッセイ技術は、スクリーニング目的のための有益な方法と、受容体リガンドの相互作用を監視するための効率的な方法を提供し、アゴニストを拮抗薬と分離することができます。
2つの均質なアッセイシステムが組み合わされて、新しい細胞ベースの機能アッセイを提供しました。アッセイは、β（2）アドレナリン受容体へのリガンド結合を識別するために使用できますが、下流の応答も同じアッセイで決定できます。クエンチング共鳴エネルギー移動（QRET）とDiscoverX Pathhunterアッセイ形式の両方により、無傷の細胞を使用することができます。均一なQRET技術は、時間分解された発光の非特異的な消光に基づいた単一の盲検アプローチであり、アゴニストと拮抗薬の受容体結合測定を可能にします。市販のパスハンターアッセイは、化学発光信号に基づいて検出できる酵素フラグメント補体に基づいています。Pathhunterテクノロジーでは、酵素補完は、アゴニスト誘発受容体の活性化のすぐ下流に記録されます。新しいマルチパラメトリック検出技術は、これら2つのアッセイ方法を組み合わせて、アゴニストと受容体への拮抗薬結合の同定、およびアゴニスト誘発反応を可能にします。QRETおよびPATHHUNTERメソッドを使用して、β（2）アドレナリン受容体リガンド（エピネフリン、テルブタリン、メタプロテレノール、サルメテロール、プロノロール、アルプロノロール、ビソプロロール、ICI 118,551、およびブチンドロール）のパネルを使用して、アッセイのパフォーマンスを実証しました。テスト済みのリガンドの信号対バックグラウンド比は、それぞれQRETとPATHHUNTERで5から11、6〜18の範囲でした。組み合わせた均一なアッセイ技術は、スクリーニング目的のための有益な方法と、受容体リガンドの相互作用を監視するための効率的な方法を提供し、アゴニストを拮抗薬と分離することができます。
Two homogeneous assay systems have been combined to provide a new cell-based functional assay. The assay can be used to identify ligand binding to β(2)-adrenergic receptors, but also the downstream response can be determined in the same assay. Both the quenching resonance energy transfer (QRET) and the DiscoveRx PathHunter assay formats allow the use of intact cells. The homogeneous QRET technique is a single-label approach based on nonspecific quenching of the time-resolved luminescence, enabling agonist and antagonist receptor binding measurements. The commercial PathHunter assay is in turn based on enzyme fragment complementation, which can be detected on the basis of chemiluminescence signal. In the PathHunter technology the enzyme complementation is recorded immediately downstream of agonist-induced receptor activation. The new multiparametric detection technology combines these two assay methods enabling the identification of agonist, and antagonist binding to the receptor, and the agonist-induced response. Using the QRET and the PathHunter methods a panel of β(2)-adrenergic receptor ligands (epinephrine, terbutaline, metaproterenol, salmeterol, propranolol, alprenolol, bisoprolol, ICI 118,551, and bucindolol) was tested to prove the assay performance. The signal-to-background ratio for tested ligands ranged from 5 to 11 and from 6 to 18 with QRET and PathHunter, respectively. Combined homogeneous assay technique can provide an informative method for screening purposes and an efficient way to monitor receptor-ligand interaction, thus separating agonist from antagonist.
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