インフルエンザの細胞ベースのスクリーニングシステムウイルスRNA転写/複製阻害剤

NA阻害剤とM2イオンチャネルブロッカーの2つのクラスの抗ウイルス剤は、インフルエンザ治療のためにライセンスされていますが、高病原性H5N1ウイルスを含む二重耐性変異体が現れました。したがって、代替治療オプションが必要です。インフルエンザAウイルスRNA（VRNA）転写/複製は、ウイルスの複製に不可欠であるため、抗ウイルス発達の有望な標的です。したがって、VRNA転写/複製阻害剤を識別するための効率的で信頼できる方法が望ましい。ここでは、インフルエンザウイルスリボ核タンパク質複合体（VRNP）を安定に発現する細胞株を確立することにより、細胞ベースのスクリーニングシステムを開発しました。この細胞株を使用した化合物ライブラリスクリーニングにより、in vitroでの読み取りおよびウイルス複製としてウイルス様RNAからレポータータンパク質発現を使用して、VRNA転写/複製を阻害する化合物を識別することができました。VRNP発現細胞は、単純で便利なハイスループットスクリーニング（HTS）システムとしての可能性を秘めているため、さまざまなRNAウイルス、特に一次スクリーンのVRNA転写/複製阻害剤を特定することを約束しています。

Although two classes of antivirals, NA inhibitors and M2 ion channel blockers, are licensed for influenza treatment, dual resistant mutants, including highly pathogenic H5N1 viruses, have appeared. Alternative treatment options are, therefore, needed. Influenza A viral RNA (vRNA) transcription/replication is a promising target for antiviral development, since it is essential for virus replication. Accordingly, an efficient and reliable method to identify vRNA transcription/replication inhibitors is desirable. Here, we developed a cell-based screening system by establishing a cell line that stably expresses influenza viral ribonucleoprotein complex (vRNP). Compound library screening using this cell line allowed us to identify a compound that inhibits vRNA transcription/replication by using reporter protein expression from virus-like RNA as a readout and virus replication in vitro. vRNP-expressing cells have potential as a simple and convenient high-throughput screening (HTS) system, and, thus, are promising to identify vRNA transcription/replication inhibitors for various RNA viruses, especially for primary screens.