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はじめに：循環中の血小板活性化は、血栓症および炎症に関連していると考えられています。したがって、敏感で使いやすいマーカーが必要です。この研究では、循環中の活性化血小板に関連する白血球平原骨材の形成を臨床的に調べるための単純で迅速なプロトコルを確立しました。 方法：白血球結合抗CD45モノクローナル抗体および白血球 - CD41モノクローナル抗体と白血球 - プラテレット凝集分析で全血を染色しました。血小板活性化には、5μMトロンビン受容体活性化ペプチド（TRAP）または2μg/mLコラーゲンを加えました。サンプルは、EPICS XL（Beckman Coulter、Miami、FL、USA）によって分析されました。単球、好中球、およびリンパ球は、CD45蛍光強度と副散乱の違いに基づいてゲートされました。各ゲートについて、CD41を発現する血小板の割合（％）を分析しました。同じ描画サンプルを抗CD62Pモノクローナル抗体で染色しました。次に、血小板CD62pの発現を、血小板細胞集団のゲーティングで分析しました。 結果：18人の健康な個人における白血球 - 溶質凝集体と血小板CD62p発現を分析しました。主に単球 - プラテレット凝集体、白血球溶質凝集体は、血小板アゴニストによって血小板を活性化すると増加しました。単球 - プラテレット凝集体と好中球 - プラテレット凝集体も、軽度の血小板活性化により時間とともに増加しました。 結論：主に単球 - プラテレット凝集体、白血球 - 平原凝集体は、循環における血小板活性化の敏感なマーカーのようです。
はじめに：循環中の血小板活性化は、血栓症および炎症に関連していると考えられています。したがって、敏感で使いやすいマーカーが必要です。この研究では、循環中の活性化血小板に関連する白血球平原骨材の形成を臨床的に調べるための単純で迅速なプロトコルを確立しました。 方法：白血球結合抗CD45モノクローナル抗体および白血球 - CD41モノクローナル抗体と白血球 - プラテレット凝集分析で全血を染色しました。血小板活性化には、5μMトロンビン受容体活性化ペプチド（TRAP）または2μg/mLコラーゲンを加えました。サンプルは、EPICS XL（Beckman Coulter、Miami、FL、USA）によって分析されました。単球、好中球、およびリンパ球は、CD45蛍光強度と副散乱の違いに基づいてゲートされました。各ゲートについて、CD41を発現する血小板の割合（％）を分析しました。同じ描画サンプルを抗CD62Pモノクローナル抗体で染色しました。次に、血小板CD62pの発現を、血小板細胞集団のゲーティングで分析しました。 結果：18人の健康な個人における白血球 - 溶質凝集体と血小板CD62p発現を分析しました。主に単球 - プラテレット凝集体、白血球溶質凝集体は、血小板アゴニストによって血小板を活性化すると増加しました。単球 - プラテレット凝集体と好中球 - プラテレット凝集体も、軽度の血小板活性化により時間とともに増加しました。 結論：主に単球 - プラテレット凝集体、白血球 - 平原凝集体は、循環における血小板活性化の敏感なマーカーのようです。
INTRODUCTION: Platelet activation in circulation is considered to be associated with thrombosis and inflammation; thus, sensitive and easy-to-use markers are necessary. In this study, we established a simple and rapid protocol to clinically examine leukocyte-platelet aggregate formation associated with activated platelets in circulation. METHODS: Whole blood was stained with PC5-conjugated anti-CD45 monoclonal antibody and fluorescent isothiocyanate-conjugated anti-CD41 monoclonal antibody for leukocyte-platelet aggregate analysis. For platelet activation, 5 μm thrombin receptor-activated peptide (TRAP) or 2 μg/mL collagen was added. Samples were analyzed by EPICS XL (Beckman Coulter, Miami, FL, USA). Monocytes, neutrophils, and lymphocytes were gated based on differences in CD45 fluorescence intensity and side scatter. For each gate, the percentage (%) of platelets expressing CD41 was analyzed. Same drawing sample was stained with anti-CD62P monoclonal antibody. Platelet CD62P expression was then analyzed with gating for platelet cell population. RESULTS: We analyzed leukocyte-platelet aggregates and platelet CD62P expression in 18 healthy individuals. Leukocyte-platelet aggregates, mainly monocyte-platelet aggregates, increased when platelets were activated by platelet agonists. Monocyte-platelet aggregates and neutrophil-platelet aggregates also increased over time with mild platelet activation. CONCLUSION: Leukocyte-platelet aggregates, mainly monocyte-platelet aggregates, appear to be a sensitive marker of platelet activation in circulation.
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