角膜上皮前駆細胞のex in vivo栽培のための培地の比較

目的：成長、増殖、分化、および液体培養した角膜上皮前駆細胞の生存率に対する3つの培地の有効性を比較する。 方法：四重上皮前駆細胞培養物は、10個のヒト角膜リムから確立され、3つの培地のプラスチック井戸で成長しました：補足ホルモン上皮培地（SHEM）、ケラチノサイト血清フリー培地（KSFM）、およびエピリフェ人。各培地で角膜上皮前駆細胞を培養することのパフォーマンスは、次のパラメーターに従って評価されました。上皮移動の成長領域。Adenosine 5'-三リン酸結合カセットメンバー2（ABCG2）、P63、KI67、サイトケラチン3（CK3）、およびビメンチン（VMT）およびリアルタイム逆転写ポリメラーゼポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）のCK3、ABCG2、ABCG2の免疫細胞化学およびp63、およびHoechst染色を使用した細胞生存率。 結果：SHEMで栽培された副皮上皮前駆細胞は、KSFMやEpiLifeと比較して、より速い移動の傾向を示しました。免疫細胞化学分析により、SHEMの増殖細胞は、前駆細胞上皮細胞（ABCG2）および推定前駆細胞（P63）に関連するマーカーの発現が低く、KSFMと上皮と比較すると分化上皮（CK3）の陽性細胞の割合が高いことが示されました。PCR分析では、ABCG2発現は、SHEMと比較してEpiLifeの統計的に高かった。P63の発現は、SHEMおよびKSFMと比較して、EpiLifeで統計的に高かった。ただし、CK3発現は、SHEMと比較してKSFMで統計的に低かった。 結論：私たちの発見に基づいて、KSFMおよびEpiLife培地で培養された細胞は、SHEMと比較して、より高い割合の辺縁上皮前駆細胞を提示したと結論付けました。

PURPOSE: To compare the effectiveness of three culture media for growth, proliferation, differentiation, and viability of ex vivo cultured limbal epithelial progenitor cells. METHODS: Limbal epithelial progenitor cell cultures were established from ten human corneal rims and grew on plastic wells in three culture media: supplemental hormonal epithelial medium (SHEM), keratinocyte serum-free medium (KSFM), and Epilife. The performance of culturing limbal epithelial progenitor cells in each medium was evaluated according to the following parameters: growth area of epithelial migration; immunocytochemistry for adenosine 5'-triphosphate-binding cassette member 2 (ABCG2), p63, Ki67, cytokeratin 3 (CK3), and vimentin (VMT) and real-time reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for CK3, ABCG2, and p63, and cell viability using Hoechst staining. RESULTS: Limbal epithelial progenitor cells cultivated in SHEM showed a tendency to faster migration, compared to KSFM and Epilife. Immunocytochemical analysis showed that proliferated cells in the SHEM had lower expression for markers related to progenitor epithelial cells (ABCG2) and putative progenitor cells (p63), and a higher percentage of positive cells for differentiated epithelium (CK3) when compared to KSFM and Epilife. In PCR analysis, ABCG2 expression was statistically higher for Epilife compared to SHEM. Expression of p63 was statistically higher for Epilife compared to SHEM and KSFM. However, CK3 expression was statistically lower for KSFM compared to SHEM. CONCLUSIONS: Based on our findings, we concluded that cells cultured in KSFM and Epilife media presented a higher percentage of limbal epithelial progenitor cells, compared to SHEM.