ヒトエンテロウイルス71株に対する抗体の普遍的な検出のための敏感で特異的なエピトープブロッキングELISAの開発ELISA

背景：ヒトエンテロウイルス71（EV71）は、幼児の手、足と口の病気（HFMD）の一般的な原因です。多くの場合、アジア太平洋地域全体の最近の発生における重度の神経疾患と死亡に関連しています。現在、EV71感染を検出するために利用可能な効率的なユニバーサル抗体検査はありません。 方法論/主要な発見：本研究では、ヒトまたは動物の血清におけるヒトEV71ウイルスに対する特定の抗体を検出するために、エピトープ遮断ELISAが開発されました。このアッセイは、単独で発現するEV71カプシドタンパク質との相互反応なしに、EV71ウイルス全体のカプシドタンパク質に特異的に結合する新しいモノクローナル抗体（mAb 1C6）に依存しています。EV71のエピトープブロッキングELISAの感度と特異性を評価し、EV71およびコックスサッキムイイルスの複数のウイルス遺伝子型に対する免疫動物血清を使用したマイクロニュートレーションと比較しました。さらに、潜在的にEV71ウイルスに感染した可能性のある人間の200の血清サンプルが、ブロッキングELISAとマイクロニュートラン化の両方でテストされました。結果は、EV71に対する抗体がELISAをブロックするエピトープをブロックする免疫動物またはヒト血清で容易に検出されたのに対し、他のエンテロウイルスに対する抗体を持つ標本は負の結果をもたらすことを示した。このアッセイは、実行するのがより簡単であるだけでなく、マイクロニュートレーションと比較してより高い感度と特異性を示しています。 結論：ユニークなMAB 1C6に基づいたエピトープブロッキングELISAは、ヒト血清におけるヒトEV71ウイルスに対する抗体の非常に敏感で100％特異的な検出を提供しました。

BACKGROUND: Human Enterovirus 71 (EV71) is a common cause of hand, foot and mouth disease (HFMD) in young children. It is often associated with severe neurological diseases and mortalities in recent outbreaks across the Asia Pacific region. Currently, there is no efficient universal antibody test available to detect EV71 infections. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDING: In the present study, an epitope-blocking ELISA was developed to detect specific antibodies to human EV71 viruses in human or animal sera. The assay relies on a novel monoclonal antibody (Mab 1C6) that specifically binds to capsid proteins in whole EV71 viruses without any cross reaction to any EV71 capsid protein expressed alone. The sensitivity and specificity of the epitope-blocking ELISA for EV71 was evaluated and compared to microneutralization using immunized animal sera to multiple virus genotypes of EV71 and coxsackieviruses. Further, 200 serum sample from human individuals who were potentially infected with EV71 viruses were tested in both the blocking ELISA and microneutralization. Results indicated that antibodies to EV71 were readily detected in immunized animals or human sera by the epitope blocking ELISA whereas specimens with antibodies to other enteroviruses yielded negative results. This assay is not only simpler to perform but also shows higher sensitivity and specificity as compared to microneutralization. CONCLUSION: The epitope-blocking ELISA based on a unique Mab 1C6 provided highly sensitive and 100% specific detection of antibodies to human EV71 viruses in human sera.