毛細管電気泳動酵素アッセイ

過去数年間、毛細管電気泳動は、高い分離効率と汎用性、および化学物質の消費量が少ないことにより、酵素アッセイに頻繁に使用される技術となっています。毛細血管電気泳動アッセイは、プリキャピラリー（またはオフライン）アッセイとキャピラリー（またはオンライン）アッセイの2つの一般的なカテゴリに分けることができます。耐久障害物では、インキュベーションがオフラインで行われ、基質と生成物はその後、毛細管電気泳動によって分析されます。キャピラリーアッセイでは、酵素反応と分析物の分離が同じ毛細血管内で行われます。このようなアッセイでは、酵素は固定化されているか、溶液中にあります。後者の技術は、電気泳動的に媒介された微量分析（EMMA）とも呼ばれ、インキュベーションと分析の個々のステップが電気泳動現象を介して実行されることを示しています。この章では、サルチュイン酵素によるモデルペプチド中のアセチル - リジン残基の脱アセチル化と、例としてアセチルコリンエステラーゼによるアセチルチオコリンの加水分解を使用した両方の技術について説明します。

In the past years, capillary electrophoresis has become a frequently used technique for enzyme assays due to the high separation efficiency and versatility as well as small sample size and low consumption of chemicals. The capillary electrophoresis assays can be divided into two general categories: pre-capillary (or offline) assays and in-capillary (or online) assays. In pre-capillary assays, the incubation is performed offline and substrate(s) and product(s) are subsequently analyzed by capillary electrophoresis. In in-capillary assays enzyme reaction and separation of the analytes are performed inside the same capillary. In such assays the enzyme is either immobilized or in solution. The latter techniques is also referred to as electrophoretically mediated microanalysis (EMMA) indicating that the individual steps of the incubation as well as analysis are performed via electrophoretic phenomena. This chapter describes both techniques using the deacetylation of acetyl-lysine residues in model peptides by sirtuin enzymes as well as the hydrolysis of acetylthiocholine by acetylcholinesterase as examples.