重度の急性呼吸症候群コロナウイルス3c様プロテアーゼ（SARS-COV 3Clpro）のポリタンパク質のオートプロセシングメカニズム

他の多くのRNAウイルスと同様に、重度の急性呼吸症候群コロナウイルス（SARS-COV）は、いくつかの非構造タンパク質を含むポリタンパク質を産生し、ウイルスプロテアーゼによって処理されます。これらのプロテアーゼはしばしばポリタンパク質内に存在し、独自のタンパク質分解活性（「オートプロセシング」）によって切除されます。反SARS-COV薬物設計の観点から、これらのプロテアーゼのオートプロセッシングメカニズムを調査することが重要です。この論文では、3C様プロテアーゼ（3Cl（Pro））とも呼ばれる、主なプロテアーゼ（M（Pro））のオートプロセッシングメカニズムを調査するための新しい方法について説明します。私たちの方法を使用して、同じ条件下で、n末端のプロシーケンス、C末端のプロシーケンス、または両方のプロフォームを使用して、成熟した形態とプロフォームの活動を測定しました。NおよびC末端の両方のプロシーケンス。データは、酵素のプロフォームがタンパク質分解活性を持ち、同じタンパク質分解活性によって刺激されていることを示しています。刺激は2つのステップで発生し、N末端切断による約8倍の刺激、C末端切断による約4倍の刺激、およびnおよび両方の型とのプロフォームと比較して、両方の末端の切断による23倍の刺激があります。C末端のプロシーケンス。このような切断は、主にトランスの方法で発生します。すなわち、プロフォームダイマーはモノマー形式を切断します。N末端プロシーケンス除去による刺激は、新しいN末端の形成のCIS（ダイマー内およびプロトマー間）効果によるものですが、C末端切断によりトランスの除去によるものです（Inter Inter-dimer）阻害効果。成熟経路の数値シミュレーションが提示されています。

Like many other RNA viruses, severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) produces polyproteins containing several non-structural proteins, which are then processed by the viral proteases. These proteases often exist within the polyproteins, and are excised by their own proteolytic activity ('autoprocessing'). It is important to investigate the autoprocessing mechanism of these proteases from the point of view of anti-SARS-CoV drug design. In this paper, we describe a new method for investigating the autoprocessing mechanism of the main protease (M(pro)), which is also called the 3C-like protease (3CL(pro)). Using our method, we measured the activities, under the same conditions, of the mature form and pro-forms with the N-terminal pro-sequence, the C-terminal pro-sequence or both pro-sequences, toward the pro-form with both N- and C-terminal pro-sequences. The data indicate that the pro-forms of the enzyme have proteolytic activity, and are stimulated by the same proteolytic activity. The stimulation occurs in two steps, with approximately eightfold stimulation by N-terminal cleavage, approximately fourfold stimulation by C-terminal cleavage, and 23-fold stimulation by the cleavage of both termini, compared to the pro-form with both the N- and C-terminal pro-sequences. Such cleavage mainly occurs in a trans manner; i.e. the pro-form dimer cleaves the monomeric form. The stimulation by N-terminal pro-sequence removal is due to the cis (intra-dimer and inter-protomer) effect of formation of the new N-terminus, whereas that by C-terminal cleavage is due to removal of its trans (inter-dimer) inhibitory effect. A numerical simulation of the maturation pathway is presented.