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臨床応用のために、皮膚細胞培養では、動物誘導型の遊離試薬が好まれます。この研究の目的は、皮膚細胞の培養と拡大のための動物由来のトリプシンと組換えトリプシンのパフォーマンスと効果を比較することでした。全厚さのヒト皮膚を0.6％コラゲナーゼで6時間消化して線維芽細胞を解放し、その後、動物由来のトリプシンで治療しました。トリプシンEDTA（TE）または組換えトリプシン。ケラチノサイトを解放するためのtryple select（ts）。次に、ケラチノサイトと線維芽細胞の両方を、培養2まで培養拡張しました。TSまたはTSのいずれかを使用して、培養拡張中の両方の細胞タイプのトリプシン化を実施しました。総細胞収率は、造血計を使用して決定されました。コラーゲンI型、コラーゲン型III（COL-III）、サイトケラチン10、およびサイトケラチン14遺伝子の発現をRT-PCRを介して定量化し、さらに免疫細胞化学染色で確認しました。私たちの研究の結果は、TEまたはTSで処理した角化細胞と線維芽細胞の両方の総細胞収量が同等であることを示しました。RT-PCRは、Col-IIIを除く皮膚特異的遺伝子の発現がTS治療群と比較してTS処理群でより高いことを示しました。2つの細胞タイプに特異的なタンパク質の発現は、TEグループとTSグループの両方で免疫細胞化学染色によって確認されました。結論として、組換えトリプシンの性能は、細胞収量と特定の細胞マーカーの発現の観点から、ヒト皮膚細胞培養のための確立された動物由来トリプシンに匹敵します。
臨床応用のために、皮膚細胞培養では、動物誘導型の遊離試薬が好まれます。この研究の目的は、皮膚細胞の培養と拡大のための動物由来のトリプシンと組換えトリプシンのパフォーマンスと効果を比較することでした。全厚さのヒト皮膚を0.6％コラゲナーゼで6時間消化して線維芽細胞を解放し、その後、動物由来のトリプシンで治療しました。トリプシンEDTA（TE）または組換えトリプシン。ケラチノサイトを解放するためのtryple select（ts）。次に、ケラチノサイトと線維芽細胞の両方を、培養2まで培養拡張しました。TSまたはTSのいずれかを使用して、培養拡張中の両方の細胞タイプのトリプシン化を実施しました。総細胞収率は、造血計を使用して決定されました。コラーゲンI型、コラーゲン型III（COL-III）、サイトケラチン10、およびサイトケラチン14遺伝子の発現をRT-PCRを介して定量化し、さらに免疫細胞化学染色で確認しました。私たちの研究の結果は、TEまたはTSで処理した角化細胞と線維芽細胞の両方の総細胞収量が同等であることを示しました。RT-PCRは、Col-IIIを除く皮膚特異的遺伝子の発現がTS治療群と比較してTS処理群でより高いことを示しました。2つの細胞タイプに特異的なタンパク質の発現は、TEグループとTSグループの両方で免疫細胞化学染色によって確認されました。結論として、組換えトリプシンの性能は、細胞収量と特定の細胞マーカーの発現の観点から、ヒト皮膚細胞培養のための確立された動物由来トリプシンに匹敵します。
Animal-derivative free reagents are preferred in skin cell culture for clinical applications. The aim of this study was to compare the performance and effects between animal-derived trypsin and recombinant trypsin for skin cells culture and expansion. Full thickness human skin was digested in 0.6 % collagenase for 6 h to liberate the fibroblasts, followed by treatment with either animal-derived trypsin; Trypsin EDTA (TE) or recombinant trypsin; TrypLE Select (TS) to liberate the keratinocytes. Both keratinocytes and fibroblasts were then culture-expanded until passage 2. Trypsinization for both cell types during culture-expansion was performed using either TE or TS. Total cells yield was determined using a haemocytometer. Expression of collagen type I, collagen type III (Col-III), cytokeratin 10, and cytokeratin 14 genes were quantified via RT-PCR and further confirmed with immunocytochemical staining. The results of our study showed that the total cell yield for both keratinocytes and fibroblasts treated with TE or TS were comparable. RT-PCR showed that expression of skin-specific genes except Col-III was higher in the TS treated group compared to that in the TE group. Expression of proteins specific to the two cell types were confirmed by immunocytochemical staining in both TE and TS groups. In conclusion, the performance of the recombinant trypsin is comparable with the well-established animal-derived trypsin for human skin cell culture expansion in terms of cell yield and expression of specific cellular markers.
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