ATP測定とC1Q/C4B結合を使用した補体依存性細胞毒性の評価

抗体治療の主要な問題の1つは、有効性の向上です。最近の研究は、抗体療法の改善におけるエフェクター機能の重要な役割を強調しています。エフェクター機能の中で、補体依存性細胞毒性（CDC）は、C1Qサブユニットの抗体のFC領域への結合によってトリガーされる活性化のカスケードによって細胞溶解を誘導し、いくつかの抗体療法のメカニズムの一部です。CDCは、FCアイソタイプエンジニアリングまたはFC遺伝的変異、またはFCグリコシル化プロファイルの修飾によって調節することができます。CDCに対するこのような修飾の影響を評価するために、ATP測定に基づく発光法を説明し、腫瘍損傷細胞を推定し、FC領域でのC1Qの結合と細胞表面上のC4Bの結合を評価するフローサイトメトリー法を説明します。フローサイトメトリーによる補体タンパク質分析と相まって、CDCをトリガーする抗体能力を評価するために必要なすべての方法が含まれます。

One of the major issues for antibody treatment is enhancement of efficacy. Recent studies have highlighted the important role of effector functions in improvement of antibody therapy. Among effector functions, complement-dependent cytotoxicity (CDC), which induces cell lysis by a cascade of activation triggered by the binding of C1q subunits to the Fc regions of antibodies bound to the cell surface, is part of the mechanism of several antibody therapies. CDC can be modulated by either Fc isotype engineering or Fc genetic mutations or Fc glycosylation profile modifications. To evaluate the impact of such modifications on CDC, we describe a luminescence method based on ATP measurement to estimate tumor damaged cells and a flow cytometry method to evaluate the binding of C1q on the Fc region and the binding of C4b on cell surface. The luminescence method coupled with complement protein analysis by flow cytometry encompasses all needed methods to evaluate antibody ability to trigger CDC.