鶏におけるプロラクチン受容体（CPRLR）遺伝子の分子特性化：遺伝子構造、組織発現、プロモーター分析、およびチキンプロラクチン（CPRL）およびプロラクチン様タンパク質（CPRL-L）との相互作用

この研究では、プロラクチン受容体（PRLR）の遺伝子構造、組織の発現、およびプロモーターの使用と、プロラクチン（PRL）との相互作用と新たに同定されたプロラクチン様タンパク質（PRL-L）が鶏で調査されました。結果は、（1）PRLR遺伝子が5'レースとRT-PCRアッセイにより少なくとも25のエクソンで構成されていることがわかった。（2）エクソン組成で異なる複数のPRLR 5'-UTR配列は、5'レースによって鶏の肝臓または腸から分離され、使用された最初のエクソン（エクソン1Gまたはエクソン1A）に従ってI型およびタイプII転写産物に細分化できます。（3）エクソン1gを含むPRLR I型転写産物は、RT-PCRによって成体腎臓と小腸で主に発現することが検出され、その発現が組織特異的プロモーター（P1）によって制御される可能性が高いことを意味します。対照的に、エクソン1Aを含むPRLRタイプII転写産物は、調べた成体および胚組織で広く発現し、その発現はエクソン1A近くのジェネリックプロモーター（P2）によって制御されます。これは、培養DF-1、HEK293、およびデュアル - リュキフェラーゼレポーターアッセイによるLovo細胞のプロモーター活性を示すことが実証されました。（4）5×STAT5-ルシフェラーゼレポーターシステムを使用して、HEPG2細胞で発現したCPRLRは、PRLR膜近位リガンド結合ドメインとの相互作用を介して組換えCPRLおよびCPRL-Lによって活性化されることが示され、CPRLのようにCPRL-LがCPRLの関数リガンドであることを示唆しています。CPRLR遺伝子の特性評価は、鳥のPRLRとそのリガンドの役割を解明するのに役立ち、鳥や哺乳類で保存されているPRLR発現の調節メカニズムに関する洞察を提供します。

In this study, gene structure, tissue expression, and promoter usage of prolactin receptor (PRLR) and its interaction with prolactin (PRL) and the newly identified prolactin-like protein (PRL-L) were investigated in chickens. The results showed that (1) PRLR gene was found to consist of at least 25 exons by 5'-RACE and RT-PCR assays; (2) multiple PRLR 5'-UTR sequences different in exon composition were isolated from chicken liver or intestine by 5'-RACE and could be subdivided into type I and type II transcripts according to the first exon used (exon 1G or exon 1A); (3) PRLR Type I transcripts with exon 1G were detected to be predominantly expressed in adult kidney and small intestine by RT-PCR, implying their expression is likely controlled by a tissue-specific promoter (P1). By contrast, PRLR type II transcripts containing exon 1A are widely expressed in adult and embryonic tissues examined and their expression is controlled by a generic promoter (P2) near exon 1A, which was demonstrated to display promoter activities in cultured DF-1, HEK293 and LoVo cells by the dual-luciferase reporter assay; (4) Using a 5×STAT5-luciferase reporter system, cPRLR expressed in HepG2 cells was shown to be activated by recombinant cPRL and cPRL-L via interaction with PRLR membrane-proximal ligand-binding domain, suggesting that like cPRL, cPRL-L is also a functional ligand of cPRLR. Collectively, characterization of cPRLR gene helps to elucidate the roles of PRLR and its ligands in birds and provides insights into the regulatory mechanisms of PRLR expression conserved in birds and mammals.