GP41 mper特異的なllama VHHには、中和のために疎水性CDR3が必要ですが、抗原認識は必要ありません。

HIV-1糖タンパク質Gp41の膜近位外部領域（MPER）は、広く中和抗体2F5および4E10によって標的とされています。現在まで、動物や人間の免疫レジメンは、HIV-1中和MPER特異的抗体を生成していません。LLAMAをGP41-MERプロテオリポソームに免疫し、MPER特異的な単一鎖抗体（VHH）、2H10を選択しました。2H10の二価形態であるBi-2H10は、単独の2H10と比較して約20倍増加した親和性を示し、TZM-BL細胞のSHIV株と同様に、さまざまな敏感で耐性のあるHIV-1株を中和しました。X線とNMR分析は、変異誘発とモデリングと組み合わせたもので、2H10がらせん状の立体構造でGP41エピトープを認識していることが明らかになりました。特に、長いCDR3の先端にあるトリプトファン100は、GP41相互作用には必須ではなく、中和に不可欠です。したがって、Bi-2H10は、MABS 2F5および4E10によって採用された中和モードと同様の中和のエピトープ認識に加えて、疎水性CDR3決定因子を必要とする免疫によって生成される抗マパー抗体です。

The membrane proximal external region (MPER) of the HIV-1 glycoprotein gp41 is targeted by the broadly neutralizing antibodies 2F5 and 4E10. To date, no immunization regimen in animals or humans has produced HIV-1 neutralizing MPER-specific antibodies. We immunized llamas with gp41-MPER proteoliposomes and selected a MPER-specific single chain antibody (VHH), 2H10, whose epitope overlaps with that of mAb 2F5. Bi-2H10, a bivalent form of 2H10, which displayed an approximately 20-fold increased affinity compared to the monovalent 2H10, neutralized various sensitive and resistant HIV-1 strains, as well as SHIV strains in TZM-bl cells. X-ray and NMR analyses combined with mutagenesis and modeling revealed that 2H10 recognizes its gp41 epitope in a helical conformation. Notably, tryptophan 100 at the tip of the long CDR3 is not required for gp41 interaction but essential for neutralization. Thus bi-2H10 is an anti-MPER antibody generated by immunization that requires hydrophobic CDR3 determinants in addition to epitope recognition for neutralization similar to the mode of neutralization employed by mAbs 2F5 and 4E10.