液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用したヒト血漿中のコデインとその活性代謝物の同時分析：コデインの経口投与後の薬物動態研究への応用

液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）に基づく迅速かつ敏感なバイオアッセイが開発され、コデインとその活性代謝産物の同時測定（モルヒネ、モルヒネ3β-グルクロニド（M3G）、モルヒネ6β-グルクロニド（M6G）を含む）を含むその活性な代謝産物がヒト血漿にあります。内部標準（IS）としてのナロキソンを添加した後の血漿のサンプル調製は、C18カートリッジでの固相抽出（SPE）に関与しました。メタノールと0.04％のギ酸溶液（pH 3.5）による勾配溶出を使用した逆相クロマトグラフィーを使用して、5分の実行時間で分離に使用しました。分析物は、コデインのM/z 300.4→215.2の遷移の複数の反応モニタリング（MRM）、モルヒネの場合は286.2→152.0、M3GおよびM6Gで462.2→286.2での複数の反応モニタリング（MRM）を使用して、陽性イオンモードで検出されました。この方法には、次のパフォーマンス特性があります。コデインで0.05-80 ng/mlの信頼できる応答範囲、M3GおよびM6G、およびすべての分析物の相関係数（R）が0.05-5.0 ng/mlの応答範囲が0.05-5.0 ng/mLです。4つの分析物すべての定量（LLOQ）の下限（LLOQ）は0.05 ng/mLでした。低濃度、高濃度レベル、高濃度レベルでの品質制御サンプルの日中および日間精度と精度は、すべての分析物に対して12％<12％相対標準偏差（RSD）および-6.9〜8.1％の相対誤差（RE）を示しました。この方法は、30 mgの経口投与後、健康なモンゴルの中国のボランティアにおけるコデインの薬物動態研究に成功裏に適用されました。

A rapid and sensitive bioassay based on liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) has been developed and validated for the simultaneous determination of codeine and its active metabolites, including morphine, morphine 3β-glucuronide (M3G) and morphine 6β-glucuronide (M6G), in human plasma. Sample preparation of plasma after the addition of naloxone as internal standard (IS) involved solid-phase extraction (SPE) on C18 cartridges. Reversed-phase chromatography using a gradient elution with methanol and 0.04% formic acid solution (pH 3.5) was used for separation in a run time of 5 min. The analytes were detected in the positive ion mode using multiple reaction monitoring (MRM) of the transitions at m/z 300.4→215.2 for codeine, 286.2→152.0 for morphine, and 462.2→286.2 for M3G and M6G. The method has the following performance characteristics: a reliable response range of 0.05-80 ng/ml for codeine, M3G and M6G and a response range of 0.05-5.0 ng/ml for morphine with correlation coefficients (r) of >0.997 for all analytes. The lower limit of quantitation (LLOQ) for all four analytes was 0.05 ng/ml. The intra- and inter-day precision and accuracy of the quality control samples at low, medium and high concentration levels showed <12% relative standard deviation (RSD) and -6.9 to 8.1% relative error (RE) for all the analytes. The method was successfully applied to a pharmacokinetic study of codeine in healthy Mongolian Chinese volunteers after a 30 mg oral dose.