アレクサ蛍光568-およびフルオレセインイソチオシアン酸塩結合抗体の光退色と光安定性の特性の比較

目的：抗体に結合した合成蛍光色素は、分子をプローブするための有用なツールです。色素化学構造に基づいて、光退色と光安定性の指標は非常に多様です。一般に、異なる蛍光色素の中で、アレクサ蛍光ファミリーは、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）やCy5などの従来の染料よりも光安定性が高いと考えられています。Alexa Fluor 568は、FITCよりも優れた光安定性と光衰弱プロファイルを持っていると推定されるAlexa Fluorファミリーのメンバーです。 材料と方法：この実験的研究では、Alexa Fluor 568とFitc染料をマウス抗ヒトネスチンモノクローナル抗体（ANM）に結合して、光退色プロファイルと光安定性インデックスを取得しました。次に、フルオロフォア/抗体比を分光光度計を使用して計算しました。結合抗体の光退色プロファイルと光安定性指数は、その後、免疫細胞化学（ICC）によって研究されました。サンプルは継続的に照らされ、蛍光顕微鏡でデジタル画像が取得されました。データはImageJソフトウェアによって処理されました。 結果：Alexa Fluor 568は、FITCよりも明るい蛍光と高い光安定性を持っています。 結論：Alexa Fluor 568は、フォトステンシング技術で使用する有能な染料であり、FITCと比較した場合、光安定性が長くなります。

OBJECTIVE: Synthetic fluorescent dyes that are conjugated to antibodies are useful tools to probe molecules. Based on dye chemical structures, their photobleaching and photostability indices are quite diverse. It is generally believed that among different fluorescent dyes, Alexa Fluor family has greater photostability than traditional dyes like fluorescein isothiocyanate (FITC) and Cy5. Alexa Fluor 568 is a member of Alexa Fluor family presumed to have superior photostability and photobleahing profiles than FITC. MATERIALS AND METHODS: In this experimental study, we conjugated Alexa Fluor 568 and FITC dyes to a mouse anti-human nestin monoclonal antibody (ANM) to acquire their photobleaching profiles and photostability indices. Then, the fluorophore/antibody ratios were calculated using a spectrophotometer. The photobleaching profiles and photostability indices of conjugated antibodies were subsequently studied by immunocytochemistry (ICC). Samples were continuously illuminated and digital images acquired under a fluorescent microscope. Data were processed by ImageJ software. RESULTS: Alexa Fluor 568 has a brighter fluorescence and higher photostability than FITC. CONCLUSION: Alexa Fluor 568 is a capable dye to use in photostaining techniques and it has a longer photostability when compared to FITC.