そずかけ種の検出と分化のための五角PCRアッセイ

発展途上国における感染症の大きさは、手頃な価格の検出方法が利用できないため、ほとんど不明です。Shigella spp。の現在の実験室診断。面倒で時間がかかり、感度が低いです。したがって、本研究では、4つの特定の遺伝子を同時に増幅する分子ベースの診断アッセイは、Shigella属のINVC、S。FlexneriのRFC、S。SonneiのWBGZ、S。dysenteriaeのRFPB、および1つの内部の内部を特定します。コントロール（OMPA）遺伝子は、Shigella sppを検出および区別するための単一の反応で開発されました。120個の甲状腺炎株と37個の非麻痺株を使用した検証により、100％の特異性が得られました。PCRの感度は、100 pgのゲノムDNA、5.4×10（4）CFU/mL、または細菌の反応混合ごとに約120 CFUでした。グラム陰性スープでの便サンプルのプレインキュベーション後、五角PCRアッセイの感度はさらに改善されました。30の下痢標本を使用した予備調査では、他の非麻痺株との交差反応がテストされませんでした。開発された五角PCRアッセイは堅牢であり、甲状腺類属の識別と、大部分の愛好家症症例の原因となる3つの甲状腺種種の同定に不可欠な4つの標的遺伝子に関する情報を提供できると結論付けています。

The magnitude of shigellosis in developing countries is largely unknown because an affordable detection method is not available. Current laboratory diagnosis of Shigella spp. is laborious and time consuming and has low sensitivity. Hence, in the present study, a molecular-based diagnostic assay which amplifies simultaneously four specific genes to identify invC for Shigella genus, rfc for S. flexneri, wbgZ for S. sonnei, and rfpB for S. dysenteriae, as well as one internal control (ompA) gene, was developed in a single reaction to detect and differentiate Shigella spp. Validation with 120 Shigella strains and 37 non-Shigella strains yielded 100% specificity. The sensitivity of the PCR was 100 pg of genomic DNA, 5.4 × 10(4) CFU/ml, or approximately 120 CFU per reaction mixture of bacteria. The sensitivity of the pentaplex PCR assay was further improved following preincubation of the stool samples in gram-negative broth. A preliminary study with 30 diarrhoeal specimens resulted in no cross-reaction with other non-Shigella strains tested. We conclude that the developed pentaplex PCR assay is robust and can provide information about the four target genes that are essential for the identification of the Shigella genus and the three Shigella species responsible for the majority of shigellosis cases.