個人フローサイトメーターを使用した犬のリンパ腫の迅速で効果的でユーザーフレンドリーな免疫表現型

背景：臨床獣医学における免疫表現型のためのフローサイトメトリーの広範な使用は、かなりの実験室スペース、スタッフの時間、専門知識のコストと要件によって制限されています。Guava Eisecyte Plus（Guava Technologies、Hayward、CA、US）は、これらの制限に対処するために設計された最初の個人的なベンチトップフローサイトメーターです。 目的：この研究の目的は、犬のリンパ腫への犬の免疫表現型の免疫表現型を個人フローサイトメーターに適応させることでした。。血液中の免疫表現型TおよびBリンパ球の個人フローサイトメーターのパフォーマンスは、通常の犬とリンパ増殖性疾患の犬からのリンパ節の性能を、2つのモノクローナル抗体のみ（CD3およびCD21に対して）のみを使用して評価され、2つの従来のフローシトメテールを使用した分析と比較して評価されました。。 方法：リンパ増殖性疾患の26匹の犬（リンパ腫の23、リンパ球性白血病を伴う33）を15のコントロール（2つの非リンパ腫リンパ節と13の非白血病血液球体を研究しました。リンパ球は、蛍光標識、CD3に対する蛍光標識、単眼抗体に対する免疫染色されました。CD21TとB細胞の免疫表現型とB細胞の半分の識別（14の血液節と11のリンパ節）も、同じ方法と従来のフローサイトメーター（FACSCALIBUR、CYAN DAKO）を使用して決定されました白血球の種類を識別するフローサイトメーター、21の血液サンプルについてリンパ球の異なるカウントを決定し、自動血液学のものと比較しましたアナライザー（Cell-Dyn 3500、n = 11およびAdvia 2120、n = 10）が蛍光顕微鏡を使用して評価されました。 結果：免疫表現型のプロトコルは、サンプルの受領時から免疫表現型の報告まで2〜3時間かかりました。パーソナルフローサイトメーターの差動リンパ球数カウントは、自動血液分析装置と高度に相関しています（n = 20; r = 0.97、p <0.0001）。パーソナルフローサイトメーターは、一貫してカウントされますが、軽度に、サンプル内のリンパ球の割合を過小評価していました（平均バイアス-5.3％）。個人のフローサイトメーター免疫表現型数は、両方の末梢血サンプル（n = 13; r = 0.95; p <0.0001; -1.1％のバイアス）とリンパ節吸引性の両方の従来のフローサイトメーターのものと区別できませんでした（n = 11、r = 0.98; P <0.001;1つの白血病と1つのリンパ腫性リンパ節サンプルを除くすべて、リンパ増殖性疾患を分析した26の犬のサンプルのうち、B細胞またはT細胞として免疫表現型が存在する可能性があります。 結論：2つのモノクローナル抗体のみを使用すると、フローサイトメトリーによる犬のリンパ腫のほとんどの症例が免疫表現型視点で十分であり、迅速な免疫表現型を可能にすると結論付けています。個人のフローサイトメーターは、従来のフローサイトメーターと同様に、免疫表現型犬リンパ腫に効果的に使用される場合があります。ただし、パーソナルフローサイトメーターはよりアクセスしやすく、ユーザーフレンドリーであり、より低いサンプルボリュームが必要です。

BACKGROUND: Widespread use of flow cytometry for immunophenotyping in clinical veterinary medicine is limited by cost and requirement for considerable laboratory space, staff time, and expertise. The Guava EasyCyte Plus (Guava Technologies, Hayward, CA, US) is the first, personal, bench-top flow cytometer designed to address these limitations. OBJECTIVE: The aim of this study was to adapt the immunohistochemical protocol used for immunophenotyping of canine lymphoma to the personal flow cytometer for rapid, effective and user-friendly application to the diagnosis and prognosis of canine lymphoma and to demonstrate its practicality for widespread veterinary application. Performance of the personal flow cytometer for immunophenotyping T and B lymphocytes in blood and lymph nodes from normal dogs and dogs with lymphoproliferative disease, was assessed using only two monoclonal antibodies (against CD3 and CD21), and by comparison with analysis using two conventional flow cytometers. METHODS: 26 dogs with lymphoproliferative disease (23 with lymphoma, 3 with lymphocytic leukaemia) were studied along with 15 controls (2 non-lymphoma lymph nodes and 13 non-leukemic bloods. Lymphocytes were immunostained with fluorescent-labeled, monoclonal antibodies against CD3 and CD21. To assess the effectiveness of the personal flow cytometer in discrimination between T and B cell immunophenotypes, T and B cell counts for half the samples (14 blood and 11 lymph node) were also determined using the same method and conventional flow cytometers (FACSCalibur, Cyan Dako). To assess the effectiveness of the personal flow cytometer in discriminating between leukocyte types, lymphocyte differential counts were determined for 21 blood samples and compared with those from automated hematology analyzers (CELL-DYN 3500, n=11 and ADVIA 2120, n=10). Quality and sub-cellular distribution of immunostaining was assessed using fluorescence microscopy. RESULTS: The protocol for immunophenotyping took 2 to 3 hours to complete from the point of receipt of sample to reporting of immunophenotype. The personal flow cytometer differential lymphocyte counts correlated highly (n=20; r=0.97, p<0.0001) with those of automated haematology analyzers. The personal flow cytometer counts consistently, but mildly, underestimated the percentages of lymphocytes in the samples (mean bias of -5.3%.). The personal flow cytometer immunophenotype counts were indistinguishable from those of conventional flow cytometers for both peripheral blood samples (n=13; r=0.95; p<0.0001; bias of -1.1%) and lymph node aspirates (n=11,r=0.98; p<0.001; bias of 1%). All but one leukemic and one lymphomatous lymph node sample, out of 26 samples of dogs with lymphoproliferative disease analyzed, could be immunophenotyped as either B or T cells. CONCLUSIONS: We conclude that use of only 2 monoclonal antibodies is sufficient for immunophenotyping most cases of canine lymphoma by flow cytometry and enables rapid immunophenotyping. The personal flow cytometer may be as effectively used for immunophenotyping canine lymphoma as conventional flow cytometers. However, the personal flow cytometer is more accessible and user-friendly, and requires lower sample volumes.