多重エピトープ検出：新しい方法は抗体アレイの制限を克服します

抗体アレイは、サイトカインなどの複数のタンパク質を同時に検出するための効果的な方法として使用されています。ただし、多数の細胞タンパク質の定量化におけるそれらの使用には、次の制限があります。（i）互いに複合体を形成する可能性のあるタンパク質を同時に検出するのに適さない。（ii）ホスホおよび非ホスホエピトープなどの各タンパク質の複数のエピトープを定量的に検出できない。（iii）ホルマリン固定組織切片などの固体表面で複数のバイオマーカーを同時に検出することはできません。新しい多重エピトープ検出（MED）技術を使用して、これらの制限を克服し、現在利用可能な抗体ベースのタンパク質検出技術を改善しました。MED技術は、固定細胞または組織内のエピトープの一次抗体検出を採用し、その後、結合した抗体の溶出、およびその後のエピトープアレイによる溶出抗体の定量化を採用しています。MED法を使用して、互いに複雑でさえ、個々のタンパク質の正確な検出、タンパク質上のホスホと非ホスホエピトープの同時定量的検出、およびホルマリン固定組織切片での複数のバイオマーカーの感度的検出を示します。

Antibody arrays have been used as an effective method for simultaneously detecting multiple proteins such as cytokines. However, their use in quantifying a large number of cellular proteins has the following limitations: (i) unsuitable for simultaneously detecting proteins that may form complexes with each other; (ii) incapable of quantitatively detecting more than one epitope of each protein such as phospho- and nonphospho-epitopes; and (iii) incapable of simultaneously detecting multiple biomarkers on solid surfaces such as formalin-fixed tissue sections. Using a novel multiple epitope detection (MED) technique, we have overcome these limitations and have improved upon currently available antibody-based protein detection technologies. The MED technique employs primary antibody detection of epitopes within fixed cells or tissue, followed by elution of bound antibodies, and subsequent quantification of the eluted antibodies by an epitope array. Using the MED method, we demonstrate accurate detection of individual proteins even in complex with each other, simultaneous quantitative detection of phospho- and nonphospho-epitopes on a protein, and sensitive detection of multiple biomarkers on formalin-fixed tissue sections.