血小板GPIBβを標的とすると、血小板の接着、GPIBシグナル伝達、トロンビン生成が減少し、動脈血栓症を防ぎます

目的：糖タンパク質（GP）IB-V-IX複合体は、血小板の接着、活性化、および凝固剤活性を調節します。以前に、マウスGPIBβの細胞外ドメインに向けられたラットモノクローナル抗体であるRam.1が、流れ条件下でヒトGPIB-IX複合体にフォンウィルブランド因子にトランスフェクトされた血小板および中国のハムスター卵巣細胞の接着を減少させたことを報告しました。ここでは、GPIBを介した血小板応答およびin vitroおよびin vivo血栓形成に対するRam.1の影響を研究することにより、GPIBβの機能的重要性をさらに評価しました。 アプローチと結果：ram.1は、フォン・ウィルブランド因子に接着した後、中国のハムスター卵巣GPIB-IX細胞のGPIBを介した糸状仮足拡張を劇的に減少させたことを示しています。Ram.1は、マウス血小板をフォン・ウィルブランド因子に接着した後、糸状仮足拡張とGPIBを介したCa（2+）シグナル伝達も減少させました。Ram.1は、ホスファチジルセリン曝露を損なうことなく、血小板に富む血漿におけるトロンビン生成を阻害しました。さらに、Ram.1は、せん断依存的にコラーゲン上のマウス全血を灌流した後、血栓形成を減少させました。F（ab） '2の断片の注入がin vivoで確認されました。1腹ヨーロのレーザー梁損傷と腹部大動脈の鉗子損傷によって誘発される血栓形成の減少。対照的に、ram.1 f（ab） '2は、尾の脂肪時間を延長したり、失われた血液の量を増やしたりしませんでした。 結論：これらの発見は、GPIBα以外のサブユニットを標的とすることで、GPIB-V-IX複合体を介して抗血栓効果をもたらす可能性があるという最初の証拠です。これは、止血にわずかな影響を与える血栓形成を減らす別の方法を表している可能性があります。

OBJECTIVE: The glycoprotein (GP) Ib-V-IX complex regulates the adhesion, activation, and procoagulant activity of platelets. We previously reported that RAM.1, a rat monoclonal antibody directed against the extracellular domain of mouse GPIbβ, diminished adhesion of platelets and chinese hamster ovary cells transfected with the human GPIb-IX complex to von Willebrand factor under flow conditions. Here, we further evaluated the functional importance of GPIbβ by studying the impact of RAM.1 on GPIb-mediated platelet responses and in vitro and in vivo thrombus formation. APPROACH AND RESULTS: We show that RAM.1 dramatically reduced GPIb-mediated filopodia extension of chinese hamster ovary GPIb-IX cells after adhesion to von Willebrand factor. RAM.1 also reduced filopodia extension and GPIb-mediated Ca(2+) signaling after adhesion of mouse platelets to von Willebrand factor. RAM.1 inhibited thrombin generation in platelet-rich plasma without impairing phosphatidylserine exposure. In addition, RAM.1 reduced thrombus formation after perfusion of mouse whole blood over collagen in a shear-dependent manner. This effect was confirmed in vivo, because injection of F(ab)'2 fragments of RAM.1 diminished thrombus formation induced by laser beam injury of mesenteric arterioles and forceps injury of the abdominal aorta. In contrast, RAM.1 F(ab)'2 did not prolong the tail-bleeding time or increase the volume of blood lost. CONCLUSIONS: These findings are the first evidence that targeting a subunit other than GPIbα can lead to an antithrombotic effect via the GPIb-V-IX complex. This could represent an alternative way to reduce thrombus formation with a minor impact on hemostasis.