バッファーの種類、pH、および温度へのアスパラギンの脱アミド化依存

アスパラギンのアスパラギン酸およびイソスパラギン酸部分への脱アミド化は、モノクローナル抗体（MAB）の化学分解のための主要な経路です。適切に配合または保存されていない治療抗体の保存期間に影響を与える可能性があります。イオン交換クロマトグラフィーを使用して脱アミド化を検出するための新しいアプローチが開発され、パパイン消化したmabsをFCおよびFabフラグメントに分離しました。このことから、各フラグメントの脱アミド化速度を計算できます。貯蔵寿命を設定するのに役立つ運動パラメーターを生成するために、室温で調製され、適切な安定性温度に配置されます。溶液pHは、異なる温度で同じように調整されませんでした。40°Cでの脱アミド化速度は、基本的な緩衝液よりも酸性緩衝液の方が速かった。ただし、この傾向は、緩衝液と温度の影響を受ける水酸化物イオン濃度の変化に起因する5°Cで逆転しています。見かけの活性化エネルギーは、基本的な緩衝液よりも酸性バッファーで生成された速度で高かった。MAB1のレート-PHプロファイルは、FCおよびFABにデコンボルティングできます。FCの分離はV字型プロファイルを示しました。ペニーペプチドの脱アミド化は、高pHでの速度の原因ですが、新しい部位のdeAmidation ASN323は低PHでの速度の原因となる可能性があります。FABのプロファイルは、曲率のない直線です。

The deamidation of asparagine into aspartate and isoaspartate moieties is a major pathway for the chemical degradation of monoclonal antibodies (mAbs). It can affect the shelf life of a therapeutic antibody that is not formulated or stored appropriately. A new approach to detect deamidation using ion exchange chromatography was developed that separates papain-digested mAbs into Fc and Fab fragments. From this, deamidation rates of each fragment can be calculated. To generate kinetic parameters useful in setting shelf life, buffers prepared at room temperature and then placed at the appropriate stability temperatures. Solution pH was not adjusted to the same at different temperatures. Deamidation rate at 40°C was faster in acidic buffers than in basic buffers. However, this trend is reversed at 5°C, attributed to the change in hydroxide ion concentration influenced by buffer and temperature. The apparent activation energy was higher for rates generated in an acidic buffer than in a basic buffer. The rate-pH profile for mAb1 can be deconvoluted to Fc and Fab. The Fc deamidation showed a V-shaped profile: deamidation of PENNY peptide is responsible for the rate at high-pH, whereas deamidation of a new site, Asn323, may be responsible for the rate at low-pH. The profile for Fab is a straight line without curvature.