抗体抗原親和性とエピトープビニングの高スループットソリューションベースの測定

ヒト抗体発見の進歩により、多くの治療的に関連する標的に対する数百の高親和性抗体の選択が可能になりました。これにより、これらの選択からの出力を特徴付けるために、再現性の高い高スループット分析技術の開発が必要になりました。これらの特性の中で、エピトピックカバレッジと親和性は、鉛識別のための最も重要な特性の1つです。バイオ溶液干渉法（BLI）は、その速度と抗原消費量が少ないため、エピトープビニングの魅力的な手法です。BLIや表面プラズモン共鳴（SPR）などの表面ベースの方法は、一般的に親和性の決定に使用されますが、センサー化学および表面関連のアーティファクトは、高い親和性測定の精度を制限する可能性があります。BLIと溶液の平衡ベースの運動除外アッセイを比較すると、測定された親和性（10倍以上）の有意差が観察されました。Kinexa直接協会（K（a））速度定数測定は、これが主にBLI関連の表面現象に関連する不正確なK（a）測定によって引き起こされることを示唆しています。Kinexaに使用される運動除外アッセイの原理に基づいて、Mesoスケールディスカバリー（MSD）機器を使用して、ソリューション平衡親和性を測定するために、高スループット96ウェルプレート形式アッセイを開発しました。この改善された方法は、ソリューションベースの方法の精度と、以前は表面ベースの方法でのみ達成可能なスループットと組み合わされます。

Advances in human antibody discovery have allowed for the selection of hundreds of high affinity antibodies against many therapeutically relevant targets. This has necessitated the development of reproducible, high throughput analytical techniques to characterize the output from these selections. Among these characterizations, epitopic coverage and affinity are among the most critical properties for lead identification. Biolayer interferometry (BLI) is an attractive technique for epitope binning due to its speed and low antigen consumption. While surface-based methods such as BLI and surface plasmon resonance (SPR) are commonly used for affinity determinations, sensor chemistry and surface related artifacts can limit the accuracy of high affinity measurements. When comparing BLI and solution equilibrium based kinetic exclusion assays, significant differences in measured affinity (10-fold and above) were observed. KinExA direct association (k(a)) rate constant measurements suggest that this is mainly caused by inaccurate k(a) measurements associated with BLI related surface phenomena. Based on the kinetic exclusion assay principle used for KinExA, we developed a high throughput 96-well plate format assay, using a Meso Scale Discovery (MSD) instrument, to measure solution equilibrium affinity. This improved method combines the accuracy of solution-based methods with the throughput formerly only achievable with surface-based methods.