Aptamer/Thrombin/Aptamer-Aunps Sandwich拡張された表面プラズモン共鳴センサーサブナノロールトロンビンの検出のための

敏感で選択的なアプタマー/トロンビン/アプタマー-Aunpsサンドイッチ増強された表面プラズモン共鳴（SPR）センサーが、ネノモラサブトロンビンのリアルタイム検出のために開発されました。このプロトコルでは、1つのチオール修飾トロンビンアプタマー（TBA29）をAu-S結合を介して金ナノ粒子（AUNP）に固定化しました。他のビオチン化トロンビンアプタマー（TBA15）は、ビオチン - ストレプトアビジン認識を介してストレプトアビジン前処理SPRゴールドフィルムに接続されました。トロンビンの存在は、SPRゴールドフィルムに二重アプタマーサンドイッチ構造の形成を誘導し、トロンビンの濃度に比例したSPR信号の明らかな強化をもたらします。この提案されたアッセイは、特異性を高めるために2つの親和性アプタマーのサンドイッチ結合、信号強化のためのAUNP、およびリアルタイム検出のためのSPR信号の読み出しを利用しました。SPR信号は、0.1〜75nmの範囲のトロンビン濃度と良好な線形関係を持ち、トロンビンの検出限界は0.1nmという低いと判断されました。アプタマー官能化AUNPは、SPR応答の信号を強化し、AUNPのない直接検出形式と比較して4倍および5倍の検出限界を増加させることがわかった。このセンサーは、BSAやリゾチームなどの他のタンパク質の影響を受けずに、トロンビンの優れた選択性も示しました。さらに、この提案されたSPRセンシングプラットフォームは、希釈されたヒト血清サンプルのトロンビン分析に正常に適用されました。

A sensitive and selective aptamer/thrombin/aptamer-AuNPs sandwich enhanced surface plasmon resonance (SPR) sensor has been developed for real-time detection of subnanomolar thrombin. In this protocol, one thiol-modified thrombin aptamer (TBA29) was immobilized on gold nanoparticles (AuNPs) via Au-S bonding. The other biotinylated thrombin aptamer (TBA15) was grafted onto streptavidin pretreated SPR gold film through biotin-streptavidin recognition. The presence of thrombin would then induce the formation of a double aptamer sandwich structure on the SPR gold film and results in obvious enhancement of SPR signal, which was proportional to the concentration of thrombin. This proposed assay took advantage of sandwich binding of two affinity aptamers for increased specificity, AuNPs for signal enhancement, as well as SPR signal readout for real-time detection. The SPR signal had a good linear relationship with thrombin concentration in the range of 0.1-75nM, and the detection limit for thrombin was determined to be as low as 0.1nM. It was found that aptamer functionalized AuNPs enhanced the signal of SPR response and thus increased the limit of detection 4-fold and 5-fold compared to direct detection format without AuNPs. This sensor also showed good selectivity for thrombin without being affected by some other proteins, such as BSA and lysozyme. Furthermore, this proposed SPR sensing platform was successfully applied to thrombin analysis in diluted human serum samples.