鉛212（212pb）でタンパク質とペプチドを標識するための方法論

はじめに：アルファ粒子は、標的α粒子療法（TAT）または放射免疫療法（RIT）に使用される場合、細胞毒性の絶妙な程度の細胞毒性を持っています。（212）α放射核種のin vivo発生器として作用するPB（212）BIは、HER2結合抗体、トラスツズマブの標識に使用した場合、臨床前研究で大きな期待を示しています。現在、（212）PB放射標識トラスツズマブを採用した最初のRIT臨床試験が進行中です。このレポートは、関連する前臨床実験と同様に臨床試験で使用するために生成された詳細な現在のプロトコル操作と手順を提供し、（224）を介して提供される（212）Pbを含むタンパク質またはペプチドの標識を詳細に説明しています。RAベースのジェネレーターシステム。 方法：（212）PBは、塩酸（2M）を使用して（224）RA/（212）PBジェネレーターから溶出しました。発電機の溶出器を蒸発させ、硝酸（8M）で消化した後、希釈硝酸（0.1m）で（212）Pbを抽出しました。（212）Pbの希釈硝酸溶液を使用して、免疫凝縮酸トラスツズマブ-TCMC（2-（4-イソチオシアナトベンジル-1,4,7,10-テトラザ-1,4,7,10、Tetra-（2-）の標識を使用して使用しました。カルバモニルメチル）-cyclododecane）ph5.5。 結果：発電機からの（212）Pbの溶出は効率的であり、利用可能な（212）PBの90％を超える収量を得ていました。トラスツズマブ-TCMCは、ITLCにより94％±4％（n = 7）の放射能収量と73％±3％（n = 7）の分離収量で効率的に標識されました。 結論：結果は、クリニックの生体内α発生器システムとして使用するために、放射性免疫環境とペプチドコンジュゲートを生成する可能性を示しています。この技術は、外科的減量、血液癌、感染症、卵巣癌などの区画癌後のマイクロメタスターゼや残留腫瘍の最小疾患の治療を含む用途に有望です。

INTRODUCTION: Alpha particles possess an exquisite degree of cytotoxicity when employed for targeted α-particle therapy (TAT) or radioimmunotherapy (RIT). (212)Pb, which acts as an in vivo generator of the α-emitting nuclide (212)Bi has shown great promise in pre-clinical studies when used to label the HER2 binding antibody, trastuzumab. Currently, the first RIT clinical trial employing (212)Pb radiolabeled trastuzumab is in progress. This report provides detailed current protocol operations and steps that were generated for use in the clinical trial as well as the relevant pre-clinical experimentation, and describes in detail the labeling of proteins or peptides with (212)Pb as provided via a (224)Ra based generator system. METHODS: (212)Pb was eluted from the (224)Ra/(212)Pb generator using hydrochloric acid (2M). The generator eluate was evaporated and digested with nitric acid (8M) followed by extraction of the (212)Pb with dilute nitric acid (0.1M). The dilute nitric acid solution of (212)Pb was used to label the immunoconjugate Trastuzumab-TCMC (2-(4-isothiocyanatobenzyl-1,4,7,10-tetraaza-1,4,7,10,tetra-(2-carbamonylmethyl)-cyclododecane) at pH5.5. RESULTS: Elution of (212)Pb from the generator was efficient yielding>90% of available (212)Pb. Trastuzumab-TCMC was efficiently labeled with a radiochemical yield of 94% ± 4% (n=7) by ITLC and an isolated yield of 73% ± 3% (n=7). CONCLUSIONS: The results show the feasibility of generating radioimmunoconjugates and peptide conjugates for use as in vivo α generator systems in the clinic. The technology holds promise in applications involving the treatment of minimal disease such as micrometastases and residual tumor after surgical debulking, hematological cancers, infections, and compartmental cancers, such as ovarian cancer.