二量体依存性緑と黄色の蛍光タンパク質

二量体化依存性蛍光タンパク質（DDFP）は、生細胞のタンパク質相互作用の検出に使用できる最近導入された遺伝的エンコードレポーターです。このクラスのツールの前駆細胞は、Discosoma Red蛍光タンパク質のホモダイマー層に由来する赤い蛍光DDFP（DDRFP）でした。ここでは、緑（DDGFP）と黄色（DDYFP）バリアントを含むDDFPSの拡張パレットのエンジニアリングとアプリケーションについて説明します。これらの最適化されたバリアントは、DDGFPのin vitroコントラストと輝度の増加と輝度の増加、DDYFPのPK Aの低下など、DDRFPに比べていくつかの利点を提供します。私たちは、両方のバリアントが生細胞のプロテアーゼ活性のバイオセンサーとして有用であることを実証します。DDGFPツールを使用して、子宮内膜近接の非常に効果的な指標を生成しました。これは、小胞体（ER）とミトコンドリアのミトコンドリア関連膜（MAM）界面を画像化するために使用できます。

Dimerization-dependent fluorescent proteins (ddFP) are a recently introduced class of genetically encoded reporters that can be used for the detection of protein interactions in live cells. The progenitor of this class of tools was a red fluorescent ddFP (ddRFP) derived from a homodimeric variant of Discosoma red fluorescent protein. Here, we describe the engineering and application of an expanded palette of ddFPs, which includes green (ddGFP) and yellow (ddYFP) variants. These optimized variants offer several advantages relative to ddRFP including increased in vitro contrast and brightness for ddGFP and increased brightness and a lowered pK a for ddYFP. We demonstrate that both variants are useful as biosensors for protease activity in live cells. Using the ddGFP tool, we generated a highly effective indicator of endomembrane proximity that can be used to image the mitochondria-associated membrane (MAM) interface of endoplasmic reticulum (ER) and mitochondria.