ウイルスDNAテザリングドメインは、mulv gagのp12タンパク質における複製欠損変異を補完します

マウス白血病ウイルス（MULV）群特異的抗原（GAG）のP12タンパク質は、前統合複合体に関連しており、P12（PM14）の変異体は核侵入または保持に欠陥を示しています。ここでは、既知のウイルステザリングタンパク質に由来するペプチド配列をコードするように設計されたP12タンパク質が、ウイルス複製の初期段階でクロマチン結合を誘導し、致命的なP12-PM14変異体を救助できることを示しています。研究されたペプチドには、カポシ肉腫ヘルペスウイルス潜在性関連核抗原（LANA）（1-23）、ヒトパピローマウイルス8 E2、およびプロトタイプの泡状ウイルスクロマチン結合配列のセグメントが含まれていました。カポシ肉腫ヘルペスウイルスラナおよびプロトタイプの泡状ウイルスクロマチン結合配列のアミノ酸置換は、ヌクレオソーム関連をブロックしたため、MULV P12-PM14の救助に失敗しました。より大きなラナペプチドによる救助であるラナ（1-32）は、染色体へのペプチド結合親和性を低下させると予測される第2部の突然変異を必要とし、GAG/P12機能に過度に高い結合親和性が干渉したことを示唆しています。これは、リターンされたタンパク質が凝縮された有糸分裂染色体との関連性が低いことを示すキメラP12-GFP融合コンストラクトの共焦点顕微鏡によってサポートされています。これらのキメラウイルスの統合部位選択の分析では、野生型MULVと比較して統合プロファイルに有意な変化は示されず、ウイルス統合の前に、テザーP12ミトーシス後の有糸分裂の放出を示唆しています。

The p12 protein of murine leukemia virus (MuLV) group-specific antigen (Gag) is associated with the preintegration complex, and mutants of p12 (PM14) show defects in nuclear entry or retention. Here we show that p12 proteins engineered to encode peptide sequences derived from known viral tethering proteins can direct chromatin binding during the early phase of viral replication and rescue a lethal p12-PM14 mutant. Peptides studied included segments of Kaposi sarcoma herpesvirus latency-associated nuclear antigen (LANA)(1-23), human papillomavirus 8 E2, and prototype foamy virus chromatin-binding sequences. Amino acid substitutions in Kaposi sarcoma herpesvirus LANA and prototype foamy virus chromatin-binding sequences that blocked nucleosome association failed to rescue MuLV p12-PM14. Rescue by a larger LANA peptide, LANA(1-32), required second-site mutations that are predicted to reduce peptide binding affinity to chromosomes, suggesting that excessively high binding affinity interfered with Gag/p12 function. This is supported by confocal microscopy of chimeric p12-GFP fusion constructs showing the reverted proteins had weaker association to condensed mitotic chromosomes. Analysis of the integration-site selection of these chimeric viruses showed no significant change in integration profile compared with wild-type MuLV, suggesting release of the tethered p12 post mitosis, before viral integration.