SPARCは、マイトティックに不活性化されたマウス胚性線維芽細胞の維持に関与しています

マウス胚線維芽細胞（MEFS）細胞などのマイトティックに不活性化されたフィーダー細胞は、ヒト多能性幹細胞（HPSC）の多能性維持において物理的および生理学的サポートに広く適用されています。ただし、フィーダー細胞の正確な支持メカニズムまたは要因はよく理解されていません。ここでは、アニーリングコントロールプライマーベースのGenefishingポリメラーゼ連鎖反応を採用することにより、野生型MEFSとマイトティカルに不活性化されたMEFS（MIMEFS）の間で差次的に発現した遺伝子を分離しました。分泌されたタンパク質酸性システインリッチ糖タンパク質（SPARC）遺伝子を特定しました。小さな干渉RNA（siRNA）を使用したMIMEFSにおけるSPARC発現の抑制は、mimefsの段階的剥離を示しました。さらに、フローサイト測定分析によるMIMEFSと比較して、SPARC siRNA-MIMEFSで維持されているOCT4およびSSEA3陽性HPS細胞集団の有意な減少が見つかりました。これらの発見は、SPARCが細胞数を失うことなくMIMEFの維持に重要な役割を果たしており、HPSCの培養をサポートするための重要な要素である可能性があることを示唆しています。

Mitotically inactivated feeder cells such as mouse embryonic fibroblast (MEFs) cells have been widely applied for physical and physiological support in the pluripotency maintenance of human pluripotent stem cells (hPSCs). However, accurate supporting mechanism or factors of feeder cells are poorly understood. Here, we isolated differentially expressed genes between wild-type MEFs and mitotically inactivated MEFs (miMEFs) by employing annealing control primer-based GeneFishing polymerase chain reaction. We identified a secreted protein acidic cysteine-rich glycoprotein (SPARC) gene that is upregulated in miMEFs. Suppression of SPARC expression in miMEFs using small interference RNA (siRNA) displayed gradual detachment of miMEFs. Furthermore, we found a significant reduction of OCT4- and SSEA3-positive hPS cell population maintained on SPARC siRNA-miMEFs compared to on miMEFs by flow cytometrical analysis. These findings suggest that SPARC plays a critical role in the maintenance of miMEFs without loss of cell number and might be a key component for supporting the culture of hPSCs.