慢性骨髄性白血病でイマチニブ耐性を引き起こすBCR-ABL1キナーゼドメイン変異の検出

染色体9と22の間の相互転座[T（9; 22）（Q34; Q11）、フィラデルフィア染色体]は、慢性骨髄性白血病（CML）の症例の約95％で発生するBCR-ABL1融合タンパク質を生成します。成人の急性リンパ芽球性白血病の症例、および急性骨髄性白血病の成人症例の5％。BCR-ABL1タンパク質は、これらの白血病の腫瘍性表現型を誘導および維持する構成的に活性化されたチロシンキナーゼです。腫瘍特異的BCR-ABL1 RNAを識別および定量化するPCRベースの方法は、フィラデルフィア陽性白血球のための超高感度診断、予後、および監視ツールであることが示されています。新しいチロシンキナーゼ阻害剤（TKI）であるイマチニブは、ほとんどのCML患者で効果的な標的治療として確認されています。しかし、イマチニブで治療されているかなりの少数の患者は、BCR-ABL1レベルの上昇によって証明されるように、薬物に対する耐性を発症します。これらの患者における耐性の最も一般的なメカニズムは、イマチニブの結合を無効にするBCR-ABL1キナーゼドメイン（KD）の変異の発生です。KD変異は非常に不均一ですが、正確な突然変異部位の識別は臨床的に重要です。他の変異ではなく、一部の変異は第二世代のTKIで効果的に治療できるためです。たとえば、1つの突然変異T315Iは、白血病をすべての第1行および第二行のTKIに耐性にします。したがって、耐性患者におけるBCR-ABL1キナーゼドメインのDNA配列決定は、TKI薬剤の変化から利益を得る可能性のある人々、または幹細胞移植などの他の治療測定を検討すべき人を特定するのに役立ちます。ここでは、CML患者の末梢血または骨髄におけるBCR-ABL1キナーゼドメインを配列決定する方法について説明します。

The reciprocal translocation between chromosomes 9 and 22 [t(9;22)(q34;q11), Philadelphia chromosome] creates a BCR-ABL1 fusion protein that occurs in approximately 95% of cases of chronic myelogenous leukemia (CML), 15% of cases of adult acute lymphoblastic leukemia, and 5% of adult cases of acute myeloid leukemia. The BCR-ABL1 protein is a constitutively activated tyrosine kinase that induces and maintains the neoplastic phenotype in these leukemias. PCR-based methods to identify and quantitate the tumor-specific BCR-ABL1 RNA have been shown to be an ultrasensitive diagnostic, prognostic, and monitoring tool for Philadelphia-positive leukemias. A novel tyrosine kinase inhibitor (TKI), imatinib, has been confirmed as an effective targeted treatment in most CML patients. However, a significant minority of patients being treated with imatinib develop resistance to the drug as evidenced by rising BCR-ABL1 levels. The most common mechanism of resistance in these patients is the development of mutations in the BCR-ABL1 kinase domain (KD) that abrogate binding of imatinib. Although KD mutations are quite heterogeneous, the identification of the exact mutation site is clinically important, as some mutations, but not others, can be effectively treated with second-generation TKIs. One mutation, T315I, for example, renders the leukemia resistant to all first- and second-line TKIs. Thus, DNA sequencing of the BCR-ABL1 kinase domain in resistant patients helps identify those who may benefit from a change in TKI agents, or those who should be considered for other therapeutic measures, such as stem cell transplantation. We describe here a method for sequencing the BCR-ABL1 kinase domain in peripheral blood or bone marrow of CML patients.