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Journal of lipid research2013Jul01Vol.54issue(7)

ヒトLDLの脂質研究のための5つの脂質抽出溶媒システムの比較

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文献タイプ:
  • Comparative Study
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

液体と組織のリピドームプロファイルは、シグナル伝達分子がますます理解されているため、脂質が存在する脂質の効果的かつ代表的な抽出に依存するため、脂質の役割が成長しています。脂質抽出に適した多くの溶媒システムが一般的に使用されていますが、複数の脂質クラスにわたる有効性の包括的な調査は実施されていません。これに対処するために、標準脂質化系ボランティアのヒトLDLを使用して、5つの異なる溶媒抽出プロトコル[Folch、Bligh and dyer、酸性化ブライと染色、メタノール(MeOH) - テルトブチルメチルエーテル(TBME)、およびヘキサン - イソプロパノール]およびヘキサン - イソプロパノール]を評価しました。抽出された脂質は、極性スイッチングを備えた高解像度機器でLC-MSによって分析されました。全体として、19の脂質サブクラスから350を超える異なる脂質種が特定されました。溶媒組成は、優勢な脂質クラス(トリアシルグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリン)の抽出にわずかな影響を及ぼしました。対照的に、豊富ではない脂質(ホスファチジルイノシトール、リソ脂質、セラミド、およびコレステロール硫酸塩)の抽出は、使用される溶媒システムの影響を大きく受けました。全体として、フォルチ法はLDLの広範な脂質クラスの抽出に最も効果的でしたが、ヘキサンイソプロパノール法はアポーラ脂質に最適であり、MeOH-TBME法はラクトシルセラミドに適していました。

液体と組織のリピドームプロファイルは、シグナル伝達分子がますます理解されているため、脂質が存在する脂質の効果的かつ代表的な抽出に依存するため、脂質の役割が成長しています。脂質抽出に適した多くの溶媒システムが一般的に使用されていますが、複数の脂質クラスにわたる有効性の包括的な調査は実施されていません。これに対処するために、標準脂質化系ボランティアのヒトLDLを使用して、5つの異なる溶媒抽出プロトコル[Folch、Bligh and dyer、酸性化ブライと染色、メタノール(MeOH) - テルトブチルメチルエーテル(TBME)、およびヘキサン - イソプロパノール]およびヘキサン - イソプロパノール]を評価しました。抽出された脂質は、極性スイッチングを備えた高解像度機器でLC-MSによって分析されました。全体として、19の脂質サブクラスから350を超える異なる脂質種が特定されました。溶媒組成は、優勢な脂質クラス(トリアシルグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリン)の抽出にわずかな影響を及ぼしました。対照的に、豊富ではない脂質(ホスファチジルイノシトール、リソ脂質、セラミド、およびコレステロール硫酸塩)の抽出は、使用される溶媒システムの影響を大きく受けました。全体として、フォルチ法はLDLの広範な脂質クラスの抽出に最も効果的でしたが、ヘキサンイソプロパノール法はアポーラ脂質に最適であり、MeOH-TBME法はラクトシルセラミドに適していました。

Lipidome profile of fluids and tissues is a growing field as the role of lipids as signaling molecules is increasingly understood, relying on an effective and representative extraction of the lipids present. A number of solvent systems suitable for lipid extraction are commonly in use, though no comprehensive investigation of their effectiveness across multiple lipid classes has been carried out. To address this, human LDL from normolipidemic volunteers was used to evaluate five different solvent extraction protocols [Folch, Bligh and Dyer, acidified Bligh and Dyer, methanol (MeOH)-tert-butyl methyl ether (TBME), and hexane-isopropanol] and the extracted lipids were analyzed by LC-MS in a high-resolution instrument equipped with polarity switching. Overall, more than 350 different lipid species from 19 lipid subclasses were identified. Solvent composition had a small effect on the extraction of predominant lipid classes (triacylglycerides, cholesterol esters, and phosphatidylcholines). In contrast, extraction of less abundant lipids (phosphatidylinositols, lyso-lipids, ceramides, and cholesterol sulfates) was greatly influenced by the solvent system used. Overall, the Folch method was most effective for the extraction of a broad range of lipid classes in LDL, although the hexane-isopropanol method was best for apolar lipids and the MeOH-TBME method was suitable for lactosyl ceramides.

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