メラニン細胞およびメラノーマ細胞株における上皮間葉系遷移マーカーの発現の不均一性

上皮間葉系遷移（EMT）は、上皮様のような葉系様表現型への可逆的なスイッチを記述しています。それは正常な上皮の発達に不可欠であり、癌腫の侵襲的特性にも貢献しています。分子レベルでは、EMT遷移は、接合タンパク質E-カドヘリン（CDH1）のダウンレギュレーション、カタツムリ（SNAI1）やSLUG（SNAI2）などのE-カドヘリンの転写リプレッサーのアップレギュレーションを含む一連の調整された変化によって特徴付けられます。、およびN-カドヘリンのアップレギュレーション。培養された正常メラノサイトと、神経紋章に由来するメラノーマ細胞株が、同様に調整された表現型スイッチの兆候を示したかどうかを判断したいと思いました。転移性黒色腫のニュージーランド患者に由来する正常なメラニン細胞と25の細胞株を調査しました。ほとんどの系統は、BRAF、NRAS、PIK3CA（ホスファチジルイノシトール-3-キナーゼ）、TP53（P53）、CDKN2A（P16）などの一般的な変異について以前に遺伝子型で済みました。E-カドヘリン、N-カドヘリン、微生物関連転写因子（MITF）、カタツムリ、スラッグ、AXL、P53、およびHDM2の発現をウエスタンブロッティングで比較しました。正常なメラニン細胞は、カタツムリを除くこれらの各タンパク質を発現しましたが、通常のメラノサイトとほぼすべてのメラノーマ系統はナメクジを発現しました。異なる黒色腫系統の個々のマーカーの発現は、高から低いまたは検出不能までさまざまでした。ウエスタンブロットの定量化により、MITFのメラノサイト特異的アイソフォームであるMITF-Mの発現は、E-カドヘリンの発現と正の関連があるが、N-カドヘリンとAxlの発現と逆関連することが示されました。また、特定のマーカーの発現とBRAF、NRAS、PIK3CA、TP53、またはCDKN2A変異の存在との間に明らかな関係はありませんでした。結果は、黒色腫が古典的な上皮および間葉系表現型を示さず、むしろ一方で高E-カドヘリン/高MITF-M発現、または他方に高N-カドヘリン/高Axl発現のいずれかを示すことを示唆しています。これらは、in vivoの分化した侵襲的表現型に対応する場合があります。

The epithelial-mesenchymal transition (EMT) describes a reversible switch from an epithelial-like to a mesenchymal-like phenotype. It is essential for the development of the normal epithelium and also contributes to the invasive properties of carcinomas. At the molecular level, the EMT transition is characterized by a series of coordinated changes including downregulation of the junctional protein E-cadherin (CDH1), up-regulation of transcriptional repressors of E-cadherin such as Snail (SNAI1) and Slug (SNAI2), and up-regulation of N-cadherin. We wished to determine whether cultured normal melanocytes and melanoma cell lines, which are derived from the neural crest, showed signs of a similarly coordinated phenotypic switch. We investigated normal melanocytes and 25 cell lines derived from New Zealand patients with metastatic melanoma. Most lines had been previously genotyped for common mutations such as BRAF, NRAS, PIK3CA (phosphatidylinositol-3-kinase), TP53 (p53), and CDKN2A (p16). Expression of E-cadherin, N-cadherin, microphthalmia-associated transcription factor (MITF), Snail, Slug, Axl, p53, and Hdm2 was compared by western blotting. Normal melanocytes expressed each of these proteins except for Snail, while normal melanocytes and almost every melanoma line expressed Slug. Expression of individual markers among different melanoma lines varied from high to low or undetectable. Quantitation of western blots showed that expression of MITF-M, the melanocyte-specific isoform of MITF, was positively related to that of E-cadherin but inversely related to that of N-cadherin and Axl. There was also no apparent relationship between expression of any particular marker and the presence of BRAF, NRAS, PIK3CA, TP53, or CDKN2A mutations. The results suggest that melanomas do not show the classical epithelial and mesenchymal phenotypes but rather display either high E-cadherin/high MITF-M expression on one hand, or high N-cadherin/high Axl expression on the other. These may correspond to differentiated and invasive phenotypes in vivo.