自己オリゴマー化は、可溶性組換えカルレティクリンの免疫学的活性の強化に不可欠です

私たちは最近、関節リウマチの患者の血清に見られること、および組換えCRT（RCRT）が非常に強力な免疫学的活動を示すことを伝えていることを最近報告しました。ここでは、RCRTフラグメント18-412（RCRT/18-412）、RCRT/39-272、RCRT/120-308、およびRCRT/120-250が溶液中に自己オリゴマー化できることを示しています。in vitroでマクロファージを活性化する際に、ネイティブCRT（NCRT、マウス肝臓から分離）。CRTの活性部位を残基150-230に絞り込みましたが、その活動は二量体化にも依存します。対照的に、RCRT/18-197はほぼ完全に非アクティブです。RCRT/18-412がゲルろ過によってオリゴマーとモノマーに分画されると、オリゴマーはin vitroでマクロファージを活性化し、in vivoで特定の抗体を誘導するという点で免疫学的活性のほとんどを維持していますが、モノマーは比較してはるかに活性が低くなります。さらに、RCRT/18-412オリゴマーは、マクロファージへの結合および取り込みにおいてモノマーよりもはるかに優れています。マクロファージエンドサイトーシスの阻害は、RCRT/18-412の刺激効果を部分的にブロックします。198-230の残基間のCRTマップの免疫学的に活性な部位と、可溶性CRTは、そのオリゴマー化を支持する微小環境で強力な免疫病理学的活性を獲得できると結論付けています。

We have recently reported that calreticulin (CRT), a luminal resident protein, can be found in the sera of patients with rheumatoid arthritis and also that recombinant CRT (rCRT) exhibits extraordinarily strong immunological activities. We herein further demonstrate that rCRT fragments 18-412 (rCRT/18-412), rCRT/39-272, rCRT/120-308 and rCRT/120-250 can self-oligomerize in solution and are 50-100 fold more potent than native CRT (nCRT, isolated from mouse livers) in activating macrophages in vitro. We narrowed down the active site of CRT to residues 150-230, the activity of which also depends on dimerization. By contrast, rCRT/18-197 is almost completely inactive. When rCRT/18-412 is fractionated into oligomers and monomers by gel filtration, the oligomers maintain most of their immunological activities in terms of activating macrophages in vitro and inducing specific antibodies in vivo, while the monomers were much less active by comparison. Additionally, rCRT/18-412 oligomers are much better than monomers in binding to, and uptake by, macrophages. Inhibition of macrophage endocytosis partially blocks the stimulatory effect of rCRT/18-412. We conclude that the immunologically active site of CRT maps between residues 198-230 and that soluble CRT could acquire potent immuno-pathological activities in microenvironments favoring its oligomerization.