B型肝炎ウイルスを検出するためのサザンブロットアッセイは、細胞培養から共有閉じた円形DNAを閉じています

慢性B型肝炎は、世界中で約3億5,000万人に影響を及ぼし、肝硬変と肝臓がんを引き起こし、B型肝炎とその合併症で毎年約100万人が死亡している、かなりの公衆衛生負担のままです。B型肝炎は、B型肝炎ウイルス（HBV）感染によって引き起こされます。ウイルスライフサイクルの必須成分として、HBVは共有結合閉じた円形DNA（CCCDNA）が合成され、感染した肝細胞の核の低コピー数で維持され、すべてのウイルスRNAの転写テンプレートとして機能します。したがって、CCCDNAは、ウイルス感染と持続性の確立に責任があります。CccDNAの存在と寿命はまた、B型肝炎の現在の抗ウイルス療法の限界を説明するかもしれません。したがって、CCCDNAの形成と調節の根底にあるメカニズムを理解することは、HBVの病因を理解し、B型肝炎の治療法を見つける上で重要です。ここでは、プロトコルについて説明します。HBV CCCDNA抽出と検出。この手順には、（1）HIRTタンパク質を含まないDNA抽出法によるHBV CCCDNA抽出と（2）サザンブロット分析によるHBV CCCDNA検出の2つの主要な手順が含まれています。この方法は、細胞培養サンプルを使用したCCCDNAアッセイに対して簡単で信頼性が高く、HBV分子生物学と抗ウイルス研究の両方に役立ちます。

Chronic hepatitis B remains a substantial public health burden affecting approximately 350 million people worldwide, causing cirrhosis and liver cancer, and about 1 million people die each year from hepatitis B and its complications. Hepatitis B is caused by hepatitis B virus (HBV) infection. As an essential component of the viral life cycle, HBV covalently closed circular DNA (cccDNA) is synthesized and maintained at low copy numbers in the nucleus of infected hepatocytes, and serves as the transcription template for all viral RNAs. Therefore, cccDNA is responsible for the establishment of viral infection and persistence. The presence and longevity of cccDNA may also explain the limitations of current antiviral therapy for hepatitis B. Thus, understanding the mechanisms underlying cccDNA formation and regulation is critical in understanding the HBV pathogenesis and finding a cure for hepatitis B. Here we describe a protocol for HBV cccDNA extraction and detection in detail. The procedure includes two major steps: (1) HBV cccDNA extraction by Hirt protein-free DNA extraction method and (2) HBV cccDNA detection by Southern blot analysis. The method is straightforward and reliable for cccDNA assay with cell culture samples, and it is useful for both HBV molecular biology and antiviral research.