病原体誘導プロセスを研究するために蛍光マーカー分子を発現する安定した細胞株の急速生成

ウイルス学は、蛍光タンパク質（FP）の導入から、ウイルスおよび細胞構造へのタグとして大きな恩恵を受けています。高度なイメージングテクノロジーを使用すると、リアルタイムで生細胞システムにおける宿主と病原体の相互作用を観察することができます。したがって、宿主と病原体の相互作用を研究するための高品質の遺伝子ツールの生成は、このタイプの分析のさらなる開発に不可欠になります。この章では、宿主と病原体の相互作用の分析に使用するFPタグ付きタンパク質を発現する安定した細胞株を迅速に生成する普遍的で信頼できる方法について説明します。このプロトコルは、オートファゴソームとアクチン細胞骨格の重要性について認識されている2つの細胞構造に例示されていますが、実質的にすべての導入遺伝子またはFPに適用できます。これは、Commercial FLP-IN™およびGATEWAY™システム（Life Technologies）に基づいており、Gateway™テクノロジーによるFPタグ付きトランスジェンの迅速な生成を可能にし、その後、単一の転写活性ゲノム再結合軌跡を含む細胞株に組み合わせます。

Virology has greatly benefited from the introduction of fluorescent proteins (FP's) as tags to viral as well as cellular structures. With advanced imaging technologies it is now possible to observe host-pathogen interactions in living cell systems in real-time. The generation of high-quality genetic tools to study host-pathogen interactions therefore becomes imperative for the further development of this type of analysis. In this chapter we describe a universal and reliable method to rapidly generate stable cell lines expressing FP-tagged proteins to be used for the analysis of host-pathogen interactions. The protocol is exemplified for two cellular structures recognized for their importance in the host-pathogen interplay: autophagosomes and the actin cytoskeleton, but can be applied to virtually any transgene or FP. It is based on the commercial Flp-In™ and Gateway™ systems (Life Technologies) and allows the rapid generation of FP-tagged transgenes by Gateway™ technology followed by recombination into a cell line containing a single transcriptionally active genomic recombination locus.