C末端が切り捨てられたB型肝炎コアタンパク質のVLPライブラリー：マウスの免疫応答におけるRNAカプシド化とTh1/Th2スイッチとの相関

効率的なPBR327およびPTRPベースの大腸菌発現システムを使用して、組換えBウイルス（HBV）コア（HBC）タンパク質誘導体によって形成された粒子（VLP）のような粒子のような大規模なライブラリを生成しました。ライブラリを構築するために、遺伝子型D/サブタイプAYW2ウイルスのHBCタンパク質の遺伝子は、3`エンドおよび22のHBCバリアント（最大139 AAまでの切り捨て付き）から徐々に切り捨てられました。タンパク質は、塩沈殿とゲルろ過によって精製されました。バックグラウンドRNA結合は、すべてのC末端ARGブロックを欠いているHBC1-149によって形成されたVLPで観察され、3つのARG残基（HBC1-152）の添加はRNA結合をわずかに増加させました。2つのARGブロック（タンパク質HBC1-162およびHBC1-163）の存在により、典型的なレベルのRNA結合の約半分が生じ、3つのブロック（タンパク質HBC1-171）の存在は、典型的なレベルの典型的なレベルの約85％をもたらしました。バインディング。HBC1-175 VLPSでは、RNA結合のレベルのレベルのわずかな増加のみが見つかりました。これは、4つのARGブロックすべてを含んでいたが、全長HBCタンパク質の最後の8 AAを欠いていました。高レベルのRNAを含むVLPは、C末端ARGブロックのないHBCバリアントによって形成されたVLPよりも、抗HBC mABを持つELISAによると、抗原性が高かった。結果は、VLPが核酸によって安定化されたことを示しています。BALB/Cマウスの免疫原性は、異なるHBCタンパク質によって形成されたVLPで匹敵しましたが、TH1応答からTH2応答への明確な切り替えが、カプシ化されたRNAの喪失後に発生しました。テストされたVLPバリアントのin vitroでのリンパ球増殖の有意差は観察されませんでした。ただし、RNAカプシドの喪失は、IFN-γ誘導のレベルの低下と相関していました。これは、免疫原の潜在的なCTL活性の尺度です。

An efficient pBR327- and Ptrp-based E. coli expression system was used to generate a large-scale library of virus like particles (VLP) formed by recombinant hepatitis B virus (HBV) core (HBc) protein derivatives. To construct the library, the gene of HBc protein of the genotype D/subtype ayw2 virus was gradually truncated from the 3`-end and twenty-two HBc variants (with truncation up to 139 aa) were expressed at high levels. The proteins were purified by salt precipitation and gel filtration. Background RNA binding was observed for VLPs formed by HBc1-149, which lacked all C-terminal Arg blocks, and the addition of three Arg residues (HBc1-152) only slightly increased RNA binding. The presence of two Arg blocks (proteins HBc1-162 and HBc1-163) resulted in approximately half of the typical level of RNA binding, and the presence of three blocks (protein HBc1-171) led to approximately 85% of the typical level of binding. Only a small increase in the level of RNA binding was found for the HBc1-175 VLPs, which contained all four Arg blocks but lacked the last 8 aa of the full-length HBc protein. VLPs containing high levels of RNA had higher antigenicity according to an ELISA with anti-HBc mAbs than the VLPs formed by HBc variants without C-terminal Arg blocks and lacking RNA. The results indicate that the VLPs were stabilised by nucleic acids. The immunogenicity in BALB/c mice was comparable for VLPs formed by different HBc proteins, but a clear switch from a Th1 response to a Th2 response occurred after the loss of encapsidated RNA. We did not observe significant differences in lymphocyte proliferation in vitro for the tested VLP variants; however, the loss of RNA encapsidation correlated with a decreased level of IFN-γ induction, which is a measure of the potential CTL activity of immunogens.