平滑筋におけるアゴニスト誘発性Ca2+感作：Rhoグアニンヌクレオチド交換因子（Rhogefs）および応答速度の冗長性、ケージ化された化合物研究である

Gタンパク質結合受容体とヘテロトリマーGタンパク質のGαサブユニットを介して作用する多くのアゴニストは、[Ca（2+）] Iの増加とRhoA/Rhoa活性化キナーゼの活性化により平滑筋の収縮を誘発しますCa（2+）感作として知られる現象である収縮力を増幅する経路。Gα12/13サブユニットは、PDZ-Rhogef（PRG）および白血病関連Rhogef（LARG）を含むグアニンヌクレオチド交換因子（Rhogefs）のGタンパク性シグナル伝達様ファミリーの調節因子を活性化することが知られています。ただし、CA（2+） - 感作された力への貢献はよく理解されていません。PRG（ - / - ）マウスからの透過性血管と、臓器培養血管に中で大規模に沈黙させる新しい方法を使用して、両方のRhogefが生理学的および病態生理学的に重要なトロンボキサンA2およびエンドセリン-1受容体によって活性化されることを示します。同時活性化は、両方のRhogefの直接的かつ独立した活性化と、ヘテロ二量体化による共同リクルートの結果です。LARGによるヘテロ二量体化の原因となるPRGの分離された組換えC末端ドメインは、強く阻害されたCa（2+） - 感作した力を強く阻害します。ケイジフェニレフリンの光分解、溶液中のケイジされたグアノシン5'-O-（チオトリポシン酸）（GTPγS）を使用し、RhoA・Rhogdi錯体にCagedGTPγSまたはケージGTPを使用して、RhoGEFSの動員と活性化がAの原因であることを示しています。初期のCa（2+）過渡的力成分と位相性力成分とCa（2+） - 感作の力の開始との間の有意なタイムラグ。

Many agonists, acting through G-protein-coupled receptors and Gα subunits of the heterotrimeric G-proteins, induce contraction of smooth muscle through an increase of [Ca(2+)]i as well as activation of the RhoA/RhoA-activated kinase pathway that amplifies the contractile force, a phenomenon known as Ca(2+) sensitization. Gα12/13 subunits are known to activate the regulator of G-protein signaling-like family of guanine nucleotide exchange factors (RhoGEFs), which includes PDZ-RhoGEF (PRG) and leukemia-associated RhoGEF (LARG). However, their contributions to Ca(2+)-sensitized force are not well understood. Using permeabilized blood vessels from PRG(-/-) mice and a new method to silence LARG in organ-cultured blood vessels, we show that both RhoGEFs are activated by the physiologically and pathophysiologically important thromboxane A2 and endothelin-1 receptors. The co-activation is the result of direct and independent activation of both RhoGEFs as well as their co-recruitment due to heterodimerization. The isolated recombinant C-terminal domain of PRG, which is responsible for heterodimerization with LARG, strongly inhibited Ca(2+)-sensitized force. We used photolysis of caged phenylephrine, caged guanosine 5'-O-(thiotriphosphate) (GTPγS) in solution, and caged GTPγS or caged GTP loaded on the RhoA·RhoGDI complex to show that the recruitment and activation of RhoGEFs is the cause of a significant time lag between the initial Ca(2+) transient and phasic force components and the onset of Ca(2+)-sensitized force.