リポタンパク質の構造と機能の研究におけるモノクローナル抗体の使用

APOBの構造と機能を調査するために、ヒトLDLに向けられたモノクローナル抗体が生成されました。テストされた7つの抗体は、Holo-LDLにおけるAPOBの5つの個別の抗原決定因子に向けられていることがわかりました。抗体の1つは、培養されたヒト線維芽細胞のApoB、e受容体への125-LDLの結合を阻害しました。LDLの限られたタンパク質分解は、天然のリポタンパク質の多くの物理的、化学的、免疫学的特性を保持する比較的安定したリポタンパク質「コア」粒子の産生をもたらします。LDLの限られたタンパク質分解によるApoBの構造の摂動は、結果として生じるLDLの「コア」におけるさまざまなエピトープの発現に選択的効果をもたらしました - 一部の発現は影響を受けず、他のものは廃止されました。さらに、さまざまなエピトープは、LDLの「コア」に存在するApoBの異なるタンパク質分解断片に免疫ブロットすることによって局在する可能性があります。限られたタンパク質溶解は、水溶性切断ペプチドも提供し、その一部は免疫反応性を示しました。消化されたLDL「コア」粒子と切断ペプチドは、両方とも培養されたヒト線維芽細胞のLDL受容体と相互作用しました。これらの実験は、APOBが同様の構造のサブユニットを繰り返すことで構成される可能性があることを示唆しています。LDLの免疫反応性は、タンパク質部分自体の構造だけでなく、他のリポタンパク質成分によっても決定される場合があります。ポリクローナルとモノクローナル抗アポブ抗体の両方を利用した研究は、ApoBが異なるタイプのリポタンパク質粒子（すなわち、VLDL、IDL、LDL）で異なる反応を示すことを示しています。LDLクラス内のAPOBの免疫学的反応性を研究しました。結果は、異なるLDL製剤におけるエピトープの発現が実際に変化し、発現するエピトープの数がLDLの脂質組成の影響を受けるように見えることを示した。

In order to probe the structure and function of apoB, monoclonal antibodies directed against human LDL were produced. The seven antibodies tested were found to be directed against five individual antigenic determinants of apoB in holo-LDL. One of the antibodies inhibited the binding of 125I-LDL to the apoB, E receptor of cultured human fibroblasts. Limited proteolysis of LDL results in the production of relatively stable lipoprotein "core" particles that retain many physical, chemical and immunological properties of the native lipoprotein. Perturbations of the structure of apoB by limited proteolysis of LDL had selective effects on the expression of various epitopes in the resulting LDL "cores" - the expression of some was unaffected, others were abolished. In addition, the various epitopes could be localized by immunoblotting to different proteolytic fragments of apoB present in the LDL "cores". Limited proteolysis also provided water soluble cleavage peptides, some of which exhibited immunoreactivity. Digested LDL "core" particles and cleavage peptides both interacted with the LDL receptors of cultured human fibroblasts. These experiments suggest that apoB may consist of repeating subunits of similar structure. The immunoreactivity of LDL may be determined not only by the structure of the protein moiety itself, but also by other lipoprotein constituents. Studies utilizing both polyclonal and monoclonal anti-apoB antibodies have shown that apoB reacts differently in different types of lipoprotein particles (i.e., VLDL, IDL and LDL). We studied the immunological reactivities of apoB within the LDL class. The results showed that the expression of epitopes in different LDL preparations indeed varied, and that the number of epitopes expressed, appeared to be influenced by the lipid composition of LDL.