酵母2ハイブリッドシステムを使用して、タンパク質間相互作用を識別します

酵母2ハイブリッドシステムは現在、最も標準化されたタンパク質相互作用マッピング技術の1つです。酵母2ハイブリッドシステムの理論的根拠は、いくつかの転写因子の転写活性化ドメインからのDNA結合ドメインの物理的分離に依存しています。目的のタンパク質（BAIT）はDNA結合ドメインに融合され、相補的なDNA（cDNA）ライブラリエンコードタンパク質は転写活性化ドメインに融合されます。cDNAライブラリによってコードされるタンパク質が餌に結合すると、転写因子の両方の活性が再結合され、レポーター遺伝子からの転写が生じます。ここでは、2つの個々のタンパク質間の相互作用をテストし、GAL4ベースの酵母2ハイブリッドシステムを使用して他のタンパク質のライブラリーに対して単一のタンパク質またはドメインをスクリーニングすることにより、新しい相互作用パートナーを探すプロトコルについて説明します。

The yeast two-hybrid system is currently one of the most standardized protein interaction mapping techniques. The rationale of the yeast two-hybrid system relies on the physical separation of the DNA-binding domain from the transcriptional activation domain of several transcription factors. The protein of interest (bait) is fused to a DNA-binding domain, and complementary DNA (cDNA) library-encoded proteins are fused to a transcriptional activation domain. When a protein encoded by the cDNA library binds to the bait, both activities of the transcription factor are rejoined resulting in transcription from a reporter gene. Here, we describe protocols to test interactions between two individual proteins and to look for novel interacting partners by screening a single protein or domain against a library of other proteins using a GAL4 based yeast two-hybrid system.