体細胞融合後の柑橘類の葉のプロトプラストからの植物再生のためのサイブリダイゼーション要件のさらなる証拠

核由来の胚形成カルスまたは第2の親の葉由来プロトプラストを伴う懸濁液培養のいずれかから分離された片方の親のプロトプラストの融合を含む柑橘類の体性ハイブリダイゼーション実験は、しばしば葉の親に類似した二倍体植物の再生をもたらします。この研究では、このタイプの植物が次の3つの親の組み合わせの体細胞融合に続いて再生され、遺伝的起源（核およびオルガネラ）を決定するために分析されました：（最初にリストされ、葉の親2番目）（1）カラモンディン（C. microcarpa bunge） + 'Keen' Sour Orange（C。Aurantium L.）、（2）Cleopatra Mandarin（C。reticulata blanco） +サワーオレンジ、および（3） 'バレンシア'スイートオレンジ（C. sinensis（L.）osbeck） + 'femminello'レモン（C.リモン（L.）Burm。f。）。PGI、PGM、GOT、およびIDH推定サイブリド植物のIDHジモグラムのアイソザイム分析と、核ゲノム特異的プローブを使用したRFLP分析は、これらの植物に葉の親の核が含まれていることを示しました。MtDNA特異的プローブを使用したRFLP分析により、これらの植物には胚形成カルスドナーのミトコンドリアゲノムが含まれていることが示され、それによってサイブリダイゼーションが確認されました。CPDNA特異的プローブを使用したRFLP分析により、Cybrid植物には、1つまたは他の親のいずれかの葉緑体ゲノムが含まれていることが明らかになりました。これらの結果は、葉のプロトプラストによる胚形成プロトプラストのミトコンドリアの獲得が、体細胞融合後の体細胞胚形成を介して葉の親表現型を伴う植物を回収するための前提条件であることを示す以前の報告をサポートしています。

Somatic hybridization experiments in Citrus that involve the fusion of protoplasts of one parent isolated from either nucellus-derived embryogenic callus or suspension cultures with leaf-derived protoplasts of a second parent, often result in the regeneration of diploid plants that phenotypically resemble the leaf parent. In this study, plants of this type regenerated following somatic fusions of the following three parental combinations were analyzed to determine their genetic origin (nuclear and organelle): (embryogenic parent listed first, leaf parent second) (1) calamondin (C. microcarpa Bunge) + 'Keen' sour orange (C. aurantium L.), (2) Cleopatra mandarin (C. reticulata Blanco) + sour orange, and (3) 'Valencia' sweet orange (C. sinensis (L.) Osbeck) + 'Femminello' lemon (C. limon (L.) Burm. f.). Isozyme analyses of PGI, PGM, GOT, and IDH zymograms of putative cybrid plants, along with RFLP analyses using a nuclear genome-specific probe showed that these plants contained the nucleus of the leaf parent. RFLP analyses using mtDNA-specific probes showed that these plants contained the mitochondrial genome of the embryogenic callus donor, thereby confirming cybridization. RFLP analyses using cpDNA-specific probes revealed that the cybrid plants contained the chloroplast genome of either one or the other parent. These results support previous reports indicating that acquisition of the mitochondria of embryogenic protoplasts by leaf protoplasts is a prerequisite for recovering plants with the leaf parent phenotype via somatic embryogenesis following somatic fusion.