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TAG. Theoretical and applied genetics. Theoretische und angewandte Genetik1986Sep01Vol.72issue(6)

Agrobacterium rhizogenesのバイナリベクターによる栽培トマトの変換:正常な表現型を備えたトランスジェニック植物は、バイナリベクターT-DNAを抱えていますが、ri-プラスミドT-DNAはありません

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

栽培されたトマトは、2つの手順を使用して遺伝的に形質転換されました。最初の手順では、穿刺された子葉に「武装解除」アグロバクテリウムチュームファシエンス株LBA4404またはA. rhizogenes株A4に感染しました。PARC8のキメラネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(NPT II)遺伝子は、形質転換された植物細胞にカナマイシンを含む培地で成長する能力を付与しました。再形成可能な形成により、異なるトマト遺伝子型にカナマイシン耐性形質転換体が得られました。NPT II活性は、形質転換されたカリおよびトランスジェニック植物で検出されました。これらの植物はすべて、表現型が正常で、肥沃で、種子が施されていました。2番目の手順を使用して、倒立子葉を使用して、A。rhizogenesによって誘発された毛状の根から変換されたトマト植物を回収しました。この場合、すべてのトランスジェニック植物は、他の種について報告されている毛状の根由来植物と同様の表現型を示しました。これらの植物のサザンブロット分析により、PARC8-T-DNAを表す両方のプローブとA4 Ri-プラスミドのT-DNAで植物DNAがハイブリダイズされていることが明らかになりました。しかし、最初の手順からの表現型正常なトランスジェニック植物の南部分析により、PARC8-T-DNAのみが植物ゲノムに存在することが明らかになり、PARC8-T-DNAがPRI A4-T-DNAとは無関係に植物ゲノムに統合されたことを示しています。カナマイシン耐性特性に対するこれらの表現型的に正常なトランスジェニック植物の遺伝的分析は、それぞれ自己(R1)および交差する子孫に対して、メンデル比3∶1および1℃を示しました。

栽培されたトマトは、2つの手順を使用して遺伝的に形質転換されました。最初の手順では、穿刺された子葉に「武装解除」アグロバクテリウムチュームファシエンス株LBA4404またはA. rhizogenes株A4に感染しました。PARC8のキメラネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(NPT II)遺伝子は、形質転換された植物細胞にカナマイシンを含む培地で成長する能力を付与しました。再形成可能な形成により、異なるトマト遺伝子型にカナマイシン耐性形質転換体が得られました。NPT II活性は、形質転換されたカリおよびトランスジェニック植物で検出されました。これらの植物はすべて、表現型が正常で、肥沃で、種子が施されていました。2番目の手順を使用して、倒立子葉を使用して、A。rhizogenesによって誘発された毛状の根から変換されたトマト植物を回収しました。この場合、すべてのトランスジェニック植物は、他の種について報告されている毛状の根由来植物と同様の表現型を示しました。これらの植物のサザンブロット分析により、PARC8-T-DNAを表す両方のプローブとA4 Ri-プラスミドのT-DNAで植物DNAがハイブリダイズされていることが明らかになりました。しかし、最初の手順からの表現型正常なトランスジェニック植物の南部分析により、PARC8-T-DNAのみが植物ゲノムに存在することが明らかになり、PARC8-T-DNAがPRI A4-T-DNAとは無関係に植物ゲノムに統合されたことを示しています。カナマイシン耐性特性に対するこれらの表現型的に正常なトランスジェニック植物の遺伝的分析は、それぞれ自己(R1)および交差する子孫に対して、メンデル比3∶1および1℃を示しました。

Cultivated tomato was genetically transformed using two procedures. In the first procedure, punctured cotyledons were infected with "disarmed" Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 or with A. rhizogenes strain A4, each containing the binary vector pARC8. The chimeric neomycin phosphotransferase (NPT II) gene on pARC8 conferred on transformed plant cells the ability to grow on medium containing kanamycin. Transformation reproducible yielded kanamycin-resistant transformants in different tomato genotypes. NPT II activity was detected in transformed calli and in transgenic plants. All of these plants were phenotypically normal, fertile and set seeds. Using the second procedure, inverted cotyledons, we recovered transformed tomato plants from A. rhizogenes-induced hairy roots. In this case, all of the transgenic plants exhibited phenotypes similar to hairy root-derived plants reported for other species. Southern blot analysis on these plants revealed that the plant DNA hybridized with both probes representing pARC8-T-DNA, and the T-DNAs of the A4 Ri-plasmid. However, southern analysis on those phenotypically normal transgenic plants from the first procedure revealed that only the pARC8-T-DNA was present in the plant genome, thus indicating that the pARC8-T-DNA integrated into the plant genome independently of the pRi A4-T-DNA. Genetic analysis of these phenotypically normal transgenic plants for the kanamycin-resistance trait showed Mendelian ratios, 3∶1 and 1∶1, for selfed (R1) and in crossed progeny, respectively.

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