大豆のプロトプラストからのコーティングされた小胞の分離

コーティングされた小胞で濃縮された画分は、懸濁液培養グリシンmax（L.）Merrに由来するプロトプラストから得られました。セル。初期濃縮は、垂直ローターの線形スクロース勾配を介してプロトプラストホモジネートの等菌遠心分離によって達成されました。この勾配からのコーティングされたベジクル画分をプールし、2番目の線形スクロース勾配で速度帯状式で遠心分離して、より大きな汚染膜小胞を除去しました。コーティングされたベジクル画分で最も顕著なポリペプチド、植物「クラスリン」は、相対分子量を約でした。190 Kdaltonドデシル硫酸ナトリウム（SDS）ポリアクリルアミドゲル電気泳動により決定されます。他の濃縮ポリペプチドには、105、100、96、64、50、38、32 Kdaltonのバンドが含まれていました。この方法は、大豆プロトプラストからコーティングされた小胞を調製するためのスクロースステップ勾配を利用した手順と比較されました。イソピクニックレート帯状遠心分離手順の有効性も、ウシ脳でコーティングされた小胞の調製についてテストされました。

Fractions enriched in coated vesicles were obtained from protoplasts derived from suspension cultured Glycine max (L.) Merr. cells. Initial enrichment was achieved by isopycnic centrifugation of a protoplast homogenate through a linear sucrose gradient in a vertical rotor. The coated-vesicle fractions from this gradient were pooled and centrifuged through a second linear sucrose gradient in a rate zonal fashion to remove the larger contaminating membrane vesicles. The most prominent polypeptide in the coated-vesicle fractions, plant "clathrin", had a relative molecular mass of approx. 190 kdalton as determined by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. Other enriched polypeptides included bands at 105, 100, 96, 64, 50, 38 and 32 kdalton. This method was compared with a procedure utilizing sucrose step gradients for preparing coated vesicles from soybean protoplasts. The effectiveness of the isopycnic-rate zonal centrifugation procedure was also tested for the preparation of bovine-brain coated vesicles.