羊水は、ヒトRPE細胞培養における神経網膜前駆細胞とニューロンの出現を促進します

目的：網膜色素上皮（RPE）細胞は、適切な成長因子によって誘導されると、網膜ニューロンに分化することができます。羊水には、胎児の発達に重要なさまざまな成長因子が含まれています。この研究では、一次RPE細胞培養に対するヒト羊水（HAF）の影響を評価しました。 方法：RPE細胞は、出生後の人間の死体の球体から分離されました。孤立した細胞を播種し、10％胎児ウシ血清でDMEM/F12で成長させました。培養細胞のRPE同一性を確認するために、それらはRPE細胞特異的マーカーRPE65の存在について免疫細胞化学的に検査されました。パッセージ2〜7から得られたRPE培養物をHAFで処理し、1か月間形態学的に検査しました。治療培養で網膜ニューロンまたは前駆細胞が発達したのは、双極性（プロテインキナーゼC異性体α、PKCα）、アマクリン（細胞レチノイン酸結合タンパク質I、Crabpi）、および神経前駆細胞（ネスチン）細胞の特異的マーカーが求められ、MRNAの量をリアルタイムPCRを使用して量子化したかどうかを判断するために。 結果：HAFでRPE細胞を処理すると、RPE65陽性細胞の数が大幅に減少しましたが、PKCαおよびクラブピ陽性細胞は培養で検出されました。胎児のウシ血清処理培養培養と比較して、mRNAのレベルは、ネスチン、PKCα、およびクラブピのそれぞれ2、20、および22倍に定量的に増加しました。HAFで処理されたRPE培養物は、ネスチンなどの神経前駆細胞マーカーを発現する色素細胞と非誘惑細胞の両方を含む球体を確立しました。 結論：この研究は、HAFがRPE細胞に網膜ニューロンおよび前駆細胞に分化するように誘導することができ、網膜疾患を治療するための細胞ベースの治療法の潜在的な源を提供することを示した。

PURPOSE: Retinal pigment epithelial (RPE) cells are capable of differentiating into retinal neurons when induced by the appropriate growth factors. Amniotic fluid contains a variety of growth factors that are crucial for the development of a fetus. In this study, the effects of human amniotic fluid (HAF) on primary RPE cell cultures were evaluated. METHODS: RPE cells were isolated from the globes of postnatal human cadavers. The isolated cells were plated and grown in DMEM/F12 with 10% fetal bovine serum. To confirm the RPE identity of the cultured cells, they were immunocytochemically examined for the presence of the RPE cell-specific marker RPE65. RPE cultures obtained from passages 2-7 were treated with HAF and examined morphologically for 1 month. To determine whether retinal neurons or progenitors developed in the treated cultures, specific markers for bipolar (protein kinase C isomer α, PKCα), amacrine (cellular retinoic acid-binding protein I, CRABPI), and neural progenitor (NESTIN) cells were sought, and the amount of mRNA was quantified using real-time PCR. RESULTS: Treating RPE cells with HAF led to a significant decrease in the number of RPE65-positive cells, while PKCα- and CRABPI-positive cells were detected in the cultures. Compared with the fetal bovine serum-treated cultures, the levels of mRNAs quantitatively increased by 2-, 20- and 22-fold for NESTIN, PKCα, and CRABPI, respectively. The RPE cultures treated with HAF established spheres containing both pigmented and nonpigmented cells, which expressed neural progenitor markers such as NESTIN. CONCLUSIONS: This study showed that HAF can induce RPE cells to transdifferentiate into retinal neurons and progenitor cells, and that it provides a potential source for cell-based therapies to treat retinal diseases.