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すると翻訳の精度が向上します
背景：哺乳類細胞における組換えタンパク質過剰発現は、治療タンパク質産生における本当の課題を構成します。遺伝子発現におけるイントロン機能の発見に続いて、それらの配列にそれらを含むさまざまな発現ベクターが開発されました。この研究では、主な目標は、異なるプロモーターとイントロンを含む5'UTR（5 '非翻訳領域）の組み合わせを運ぶ新しいレンチウイルスベクター（LV）を開発することと、中国のハムスター卵巣（CHO）細胞におけるRHFVIII生産のためのLVSの設計でした。 結果：ヒトサイトメガロウイルス（CMV）または伸長因子1α（EF-1α）プロモーターを、リーダーのイントロンを含む異なる5'UTRとともに、2〜12倍の増加を含む5'UTRを組み合わせることにより、増強された緑色蛍光タンパク質（EGFP）とrhFVIIIの過渡的で安定した発現の場合、2〜12倍の増加に達しました。また、遺伝子データベースによると、プロモーターと高発現遺伝子の5'utrを提供する新しいLVが設計されました。それらの3つは、広く使用されている3つの細胞株のEF-1αプロモーターよりも優れていることが示されました。 結論：現在の研究では、異なるプロモーターと5'utrを含むLVが設計されました。過渡的および安定したアッセイでは、これらの構造の一部は、市販のプロモーターと比較してより高い活性を示しているため、治療タンパク質産生の有望な候補を構成しています。
背景：哺乳類細胞における組換えタンパク質過剰発現は、治療タンパク質産生における本当の課題を構成します。遺伝子発現におけるイントロン機能の発見に続いて、それらの配列にそれらを含むさまざまな発現ベクターが開発されました。この研究では、主な目標は、異なるプロモーターとイントロンを含む5'UTR（5 '非翻訳領域）の組み合わせを運ぶ新しいレンチウイルスベクター（LV）を開発することと、中国のハムスター卵巣（CHO）細胞におけるRHFVIII生産のためのLVSの設計でした。 結果：ヒトサイトメガロウイルス（CMV）または伸長因子1α（EF-1α）プロモーターを、リーダーのイントロンを含む異なる5'UTRとともに、2〜12倍の増加を含む5'UTRを組み合わせることにより、増強された緑色蛍光タンパク質（EGFP）とrhFVIIIの過渡的で安定した発現の場合、2〜12倍の増加に達しました。また、遺伝子データベースによると、プロモーターと高発現遺伝子の5'utrを提供する新しいLVが設計されました。それらの3つは、広く使用されている3つの細胞株のEF-1αプロモーターよりも優れていることが示されました。 結論：現在の研究では、異なるプロモーターと5'utrを含むLVが設計されました。過渡的および安定したアッセイでは、これらの構造の一部は、市販のプロモーターと比較してより高い活性を示しているため、治療タンパク質産生の有望な候補を構成しています。
BACKGROUND: Recombinant protein overexpression in mammalian cells constitutes a real challenge in therapeutic protein production. Following the discovery of intron functionality in gene expression, various expression vectors that include them in their sequences have been developed. In this study, the main goal was to develop new lentiviral vectors (LVs) carrying different promoter and intron-containing 5'UTR (5' untranslated region) combinations and the design of LVs for rhFVIII production in Chinese hamster ovary (CHO) cells. RESULTS: By combining the human cytomegalovirus (CMV) or the elongation factor 1α (EF-1α) promoters along with different 5'UTRs that included leader introns, between 2 and 12-fold increases were reached, when transient and stable expression of the enhanced green fluorescent protein (EGFP) and rhFVIII were analyzed. Also, new LVs provided with promoters and 5'UTRs from high expression genes, according to a gene database, were designed. Three of them were shown to be superior to the EF-1α promoter in three widely used cell lines. CONCLUSION: In the present work, LVs containing different promoters and 5'UTRs were designed. In transient and stable assays some of these constructs have shown higher activity compared with commercial promoters and, therefore, constitute promising candidates for therapeutic protein production.
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