液相抗体と固相の関係の特性：競争力のあるELISAテクニックの使用への影響は、馬鹿の空間的位置をマッピングする

小ゾーンサイズ排除クロマトグラフィーに基づく液相アッセイシステムを使用して、モノクローナル抗イジオトピック抗体F6のマウスプジャシトーマIgA、TEPC-15のイジオトープへの結合を調べました。クロマトグラフィーの挙動により、T-15とF6の間の強い関連性が明らかになりました。これは、以前はT-15の非結合部位エピトープを認識しているものとして固相免疫測定法によって特徴付けられていました。このクロマトグラフィーパターンは、ハプテンホスホリルコリンが抗イディオトープを阻害することができないことを示唆しています：固相免疫測定におけるイジトープ関係は、抗イディオトープ抗体の高親和性と比較してハプテンの低い親和性によって等しく説明される可能性があります。固相IgAと液相IgG間の二価相互作用は、ハプテンが複合体の解離を防ぐ程度に抗イディオトープの結合を強化するはずです。これらの固相アッセイ条件下では、ハプテン阻害の観察は、場合によっては部位の特異性を示す場合がありますが、阻害の欠如は解釈できません。固相ハプテン阻害シナリオのコンピューターシミュレーションを使用して、液体および固相反応物の親和性と濃度のさまざまな条件下で予想される結合阻害プロファイルの定性的性質を評価しました。T-15で以前に観察された明らかに異常な阻害曲線：ハプテンによる結合阻害の程度が抗イジオトープ濃度に依存しないと思われる抗T-15研究は、過剰な固相エピトープの場合に予測可能である可能性があります。プラトー阻害値は、固相および阻害剤成分の相対的な親和性定数と濃度の関数です。結果はさらに、液相抗体の親和性が固相エピトープの有効濃度を調節する可能性があることを示唆しています。

A liquid-phase assay system based on small-zone size-exclusion chromatography was used to examine the binding of a monoclonal anti-idiotopic antibody, F6, to its idiotope on the murine plasmacytoma IgA, TEPC-15. Chromatographic behavior revealed a strong association between T-15 and F6, which was previously characterized by solid-phase immunoassay as recognizing a nonbinding site epitope of the T-15. This chromatographic pattern suggests that the inability of the hapten phosphorylcholine to inhibit the anti-idiotope:idiotope relationship in solid-phase immunoassay might be equally explained by the low affinity of the hapten relative to the high affinity of the anti-idiotope antibody. Bivalent interactions between solid-phase IgA and liquid-phase IgG should enhance the binding of the anti-idiotope to an extent that would prevent the hapten from dissociating the complex. Under these solid-phase assay conditions, observation of hapten inhibition may, in some cases, indicate site specificity, but absence of inhibition cannot be interpreted. Computer simulations of solid-phase hapten inhibition scenarios were used to evaluate the qualitative nature of binding inhibition profiles expected under various conditions of liquid- and solid-phase reactant affinities and concentrations. The apparently unusual inhibition curves previously observed in the T-15:anti-T-15 studies in which the degree of binding inhibition by hapten appeared to be independent of anti-idiotope concentration may be predictable in cases of excess solid-phase epitope; the plateau inhibition value is a function of relative affinity constants and concentrations of solid-phase and inhibitor components. The results additionally suggest that the affinity of a liquid-phase antibody may modulate the effective concentration of solid-phase epitope.