Pichia pichia pastorisにおける豚ヘプシジン遺伝子と発現の人工合成

Pichia pastorisで豚ヘプシジン遺伝子を発現するために、Hepcidin遺伝子をコードするDNAフラグメントを発現することを、高度に発現した遺伝子の酵母コドン使用に適応して合成されました。KEX2シグナル切断部位は、ネイティブヘプシジンと同じN末を持つペプチドを取得するために、DNAフラグメントの5 '末端に融合しました。96-bp DNAフラグメントをPgapzaaの発現プラスミドに結び付けて、Pgapzaa-hepcidinベクターを構築し、P。pastoris（x33）に移し、86 µg/mlのタンパク質の細胞外分泌についてヘプシジン遺伝子を発現しました。2.76 kd分子量のバンドは、トリシンドデシル硫酸ナトリウム（SDS）ポリアクリルアミドゲル電気泳動（Page）分析によって検出されました。抗菌アッセイを介して、発現したヘプシジンは明らかな抗菌活性を示しました。最小限の阻害濃度（MIC）は、黄色ブドウ球菌および亜ティリスの増殖阻害でそれぞれ5.38および2.69 µg/mLでした。

In order to express swine hepcidin gene in Pichia pastoris, a DNA fragment coding hepcidin gene was synthesized with adaptation to yeast codon usage of highly expressed genes. A Kex2 signal cleavage site was fused in the 5' end of the DNA fragment for getting a peptide with the same N-end as native hepcidin. The 96-bp DNA fragment was ligated into the expression plasmid of pGAPZaA to construct pGAPZaA-hepcidin vector, which was transferred into P. pastoris (X33) to express hepcidin gene for extracellular secretion of protein at 86 µg/mL. A band of 2.76 kD molecular mass was detected by Tricine sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) analysis. Through antibacterial assay, the expressed hepcidin displayed obvious antibacterial activity. The minimal inhibitory concentration (MIC) was 5.38 and 2.69 µg/mL for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis prolification inhibitions, respectively.