強皮症患者からのSCL 70自己抗体は、DNAトポイソメラーゼIとして特定された95 kDaタンパク質を認識しています

自己免疫疾患に苦しむ患者の血清進行性全身性硬化症（PSS）は、SCL 70抗原を指定した70 kDa抗原タンパク質を認識することが報告されている自己抗体を含むことが知られています。HeLa細胞からの核抽出物を強皮症患者からの血清による免疫ブロットティングにより、そのような細胞に存在する抗原のサイズは抗原分離の状態に依存することが観察されました。プロテアーゼ阻害剤が抽出バッファーに含まれると、70 kDaタンパク質の代わりに95 kDaタンパク質が同定されました。プロテアーゼ阻害剤が省略された場合、66〜95 kDaのサイズ範囲の多数のポリペプチドが見つかりました。さらに、95 kDa抗原で親和性が精製された抗体は、66〜95 kDaポリペプチドと交配しました。これらの結果は、小さなタンパク質が95 kDa抗原の分解生成物であることを示唆しています。95 kDaタンパク質に特異的な抗体を伴うPTK-2細胞に関する免疫蛍光研究により、有糸分裂細胞の核、核種、および染色体および核小体器官領域の染色が得られました。核内のこの抗原のこの分布は、他の人によって発見されたDNAトポイソメラーゼIのDNAトポイソメラーゼIの核内分布を思い起こさせたため、PSS患者からの自己抗体と、子牛胸腺からの精製DNAトポイソメラーゼIを直接調査し、また抗体細胞核のHeLa細胞核の95 kDA抗原を突き刺しました。クロスルアクションパターンからウシDNAトポイソメラーゼIに対して上昇した異なる抗原と抗体で観察されたDNAトポイソメラーゼIは、強皮症患者で自己抗体が形成される抗原成分の1つであると結論付けています。

Sera of patients suffering from the autoimmune disease progressive systemic sclerosis (PSS) are known to contain autoantibodies which have been reported to recognize a 70 kDa antigenic protein, designated the Scl 70 antigen. By immunoblotting of nuclear extracts from HeLa cells with sera from scleroderma patients we observed that the size of the antigen present in such cells depends on the conditions of antigen isolation. When protease inhibitors were included in the extraction buffer, a 95 kDa protein was identified instead of a 70 kDa protein. When protease inhibitors were omitted, a number of polypeptides in the size range 66 to 95 kDa was found. Furthermore, antibodies which had been affinity purified on the 95 kDa antigen, crossreacted with the 66 to 95 kDa polypeptides. These results suggest that the smaller proteins were degradation products of the 95 kDa antigen. Immunofluorescence studies on PtK-2 cells with the antibody specific for the 95 kDa protein gave staining of nuclei, nucleoli and of chromosomes and the nucleolar organizer region in mitotic cells. Since this distribution of antigens within the nucleus was reminiscent of the intranuclear distribution of DNA topoisomerase I found by others we probed purified DNA topoisomerase I from calf thymus directly with the autoantibodies from PSS patients, and also the 95 kDa antigens of HeLa cell nuclei with antibodies raised against the bovine DNA topoisomerase I. From the crossreaction pattern observed with the different antigens and antibodies we conclude that DNA topoisomerase I is one of the antigenic components against which autoantibodies are formed in scleroderma patients.