トランスポゾンTN1721エンコードテットリプレッサーの発現、精製、および演算子結合

TN1721エンコードされたテトラサイクリン耐性決定要因の発現の調節は、分子レベルで記載されています。転写制御要素は、重複する発散プロモーターで構成され、ほぼ同一のシーケンスを持つ2つの演算子によって負に調節されます。調節遺伝子TERTのmRNAは、リボソーム結合部位なしで翻訳されます。この結果は、TETR mRNAのS1ヌクレアーゼマッピングとRNA配列決定によって確認されます。このmRNAの転写のための開始ヌクレオチドは、配列5'-8月のアデノシン残基です。精製されたTETリプレッサーのN末端アミノ酸配列の測定は、この8月が翻訳の開始コドンであることを証明しています。TETリプレッサータンパク質は、DNase Iフットプリントで2つのTET演算子をマッピングするためにさらに使用されます。各オペレーターにおける2つのグアノシン残基のN-7位置へのタンパク質の緊密な接触は、ジメチル硫酸を用いたメチル化保護実験から決定されます。このプロモーターと演算子のこの配置で可能なTERT遺伝子の転写の微分調節と肯定的な制御について説明します。

The regulation of expression of the Tn1721-encoded tetracycline-resistance determinant is described at the molecular level. The transcriptional control element consists of overlapping divergent promoters, which are negatively regulated by two operators with nearly identical sequence. The mRNA for the regulatory gene tetR is translated without a ribosome-binding site. This result is confirmed by S1 nuclease mapping and RNA sequencing of the tetR mRNA. The start nucleotide for transcription of this mRNA is the adenosine residue of the sequence 5'-AUG. Determination of the N-terminal amino acid sequence of the purified Tet repressor proves that this AUG is the initiation codon for translation. The Tet repressor protein is further used to map the two tet operators by DNase I footprinting. Tight contacts of the protein to the N-7 positions of two guanosine residues in each operator are determined from methylation protection experiments with dimethylsulfate. The differential regulation and positive control of transcription of the tetR gene that is possible with this arrangement of promoters and operators is discussed.