エチレン前駆体、1-アミノシクロプロパン-1-カルボン酸のアッセイおよび酵素形成

エチレンの前駆体である1-アミノサイクロプロパン-1-カルボン酸（ACC）のために、単純で敏感な化学アッセイが開発されました。このアッセイは、ピリドキサールリン酸、MnCl2およびH2O2の存在下でのpH 11.5でのACCからのエチレンの解放に基づいています。このアッセイは、トマト果物の抽出物（Lycopersicon esculentum Mill）のACCを検出し、S-アデノシルメチオニン（SAM）をACCに変換したトマトフルーツの可溶性酵素の活性を測定するために使用されました。酵素はSAMに対して13μMのkmを有し、SAMからACCへの変換は、根茎の類似体であるアミノエトキシビニルグリシン（AVG）によって競合的かつ可逆的に阻害されました。AVGのKI値は0.2μmでした。ACC形成酵素活性のレベルは、異なる発達段階の野生型トマトにおけるACCの含有量およびエチレン形成の速度と正の相関がありました。リンの成熟した果物（非熟成）トマトのミュータントは、エチレンのレベルが低いだけで、同等の年齢の野生型トマト果物よりもはるかに低いレベルのACCとACC形成酵素活性が含まれていました。

A simple and sensitive chemical assay was developed for 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC), a precursor of ethylene. The assay is based on the liberation of ethylene from ACC at pH 11.5 in the presence of pyridoxal phosphate, MnCl2 and H2O2. This assay was used to detect ACC in extracts of tomato fruits (Lycopersicon esculentum Mill.) and to measure the activity of a soluble enzyme from tomato fruit that converted S-adenosylmethionine (SAM) to ACC. The enzyme had a Km of 13 μM for SAM, and conversion of SAM to ACC was competitively and reversibly inhibited by aminoethoxyvinylglycine (AVG), an analog of rhizobitoxine. The Ki value for AVG was 0.2 μM. The level of the ACC-forming enzyme activity was positively correlated with the content of ACC and the rate of ethylene formation in wild-type tomatoes of different developmental stages. Mature fruits of the rin (non-ripening) mutant of tomato, which only produce low levels of ethylene, contained much lower levels of ACC and of the ACC-forming enzyme activity than wild-type tomato fruits of comparable age.