組織破壊のない脂肪組織間葉系幹細胞の分離：非酵素法

従来の酵素法は、脂肪組織からの間葉系幹細胞（MSC）分離に広く使用されています。この方法には大きな欠点があります。費用がかかり、時間がかかり、不均一な細胞集団が生じます。その上、細胞外マトリックスの消化は、細胞損傷を引き起こし、細胞の増殖と分化を妥協します。また、サンプルも過度に処理するため、汚染が発生しやすいためです。ここでは、細胞の生息地を乱すことなく、MSC分離のための非酵素法を導入します。動物または人間の脂肪吸引から得られた脂肪組織の小片を培養フラスコに外出させ、胎児のウシ血清（FBS）によって固定し、一晩インキュベートしました。次に、外植片をFBSを含むDMEMで灌漑しました。数日以内に、線維芽細胞様細胞は組織から移動し、急速に増殖しました。サブコンフルエントの場合、細胞を採取し、3つの通路で拡張し、免疫表現型と分化アッセイに使用しました。表面マーカーのフローサイトメトリー分析（CD44（+）、CD105（+）、CD34（ - ）、CD45（ - ））、オイルレッドOおよびアリザリンレッド染色によって判断されるように、私たちの非酵素法によって分離されたMSCは多能性でした。脂肪細胞と骨芽細胞に分化する可能性を示しました。大きな分離収率、孤立した細胞の均一性、短い手順、および高経済は、従来のプロトコルに対する私たちの方法の利点です。

The conventional enzymatic method is widely used for mesenchymal stem cells (MSCs) isolation from adipose tissue. The method holds major drawbacks; it is costly, time-consuming and results in a heterogeneous cell population. Besides, digestion of extracellular matrix causes cell injury and compromise proliferation and differentiation of the cells. Also, because of over handling the samples are also prone to contamination. Here, we introduce a non-enzymatic method for MSCs isolation without disturbing the cells habitat. Small pieces of adipose tissue obtained from animal or human liposuction were explanted into a culture flask, immobilized by fetal bovine serum (FBS) and incubated overnight. The explants were then irrigated with DMEM containing FBS. Within few days, the fibroblast-like cells migrated from the tissue and proliferated rapidly. When subconfluent, the cells were harvested, expanded through 3 passages and used for immunophenotyping and differentiation assays. As judged by flow cytometric analysis of surface markers (CD44(+), CD105(+), CD34(-), CD45(-)), Oil Red O and Alizarin Red staining, the MSCs isolated by our non-enzymatic method were pluripotent and exhibited the potential for differentiation into adipocyte and osteoblast. Great isolation yields, homogeneity of isolated cells, brief procedure, and high economy are the advantages of our method over the conventional protocol.