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この作業の目的は、肉から拡張スペクトルβ-ラクタマーゼ(ESBL)生産腸内菌科の検出のためにループ媒介等温増幅(LAMP)を使用して分子法を開発し、異なる分離寒天やマイクロアレイと比較することでした。ランプアッセイは、CTX-Mグループ1、2、および9およびOXA-10様遺伝子のために開発されました。鶏肉、子羊、牛肉、豚肉、および七面鳥のサンプルに、8株のESBL生産腸内細菌科を使用して、10、100、および1,000 CFU/グラムでスパイクされました(CTX-Mシーケンスタイプ1、2、3、14、15、OXA-11、SHV-2、TEM-52)+/-競合他社の生物の混合。サンプルは、クロマガルCTX、オキソイドESBLブリリアンスアガー、および1 mg/Lセフォタキシムを備えたMacConkey Agarにメッキする前に、緩衝ペプトン水(BPW)+/-抗菌性で一晩濃縮しました。選択したBPWスープは、ランプアッセイ、マイクロアレイ、および寒天上のセフポドキシムディスクを使用してテストされました。10または100 CFU/グラムESBL(天然植物のみ)でスパイクされた牛肉、豚肉、子羊、七面鳥のESBL生産者の分離/検出のために、すべての寒天とランプアッセイは、ESBLスパイク株の100%の感度と特異性を示しました。鶏のサンプルでは、ランプと発色症の両方が、MacConkey寒天と比較して、特に競合他社の細菌を追加した場合、ESBLの分離に対する感度と特異性が改善されたことを示しました。それに比べて、セフポドキシムディスク法とマイクロアレイは感度の低下を示しました。
この作業の目的は、肉から拡張スペクトルβ-ラクタマーゼ(ESBL)生産腸内菌科の検出のためにループ媒介等温増幅(LAMP)を使用して分子法を開発し、異なる分離寒天やマイクロアレイと比較することでした。ランプアッセイは、CTX-Mグループ1、2、および9およびOXA-10様遺伝子のために開発されました。鶏肉、子羊、牛肉、豚肉、および七面鳥のサンプルに、8株のESBL生産腸内細菌科を使用して、10、100、および1,000 CFU/グラムでスパイクされました(CTX-Mシーケンスタイプ1、2、3、14、15、OXA-11、SHV-2、TEM-52)+/-競合他社の生物の混合。サンプルは、クロマガルCTX、オキソイドESBLブリリアンスアガー、および1 mg/Lセフォタキシムを備えたMacConkey Agarにメッキする前に、緩衝ペプトン水(BPW)+/-抗菌性で一晩濃縮しました。選択したBPWスープは、ランプアッセイ、マイクロアレイ、および寒天上のセフポドキシムディスクを使用してテストされました。10または100 CFU/グラムESBL(天然植物のみ)でスパイクされた牛肉、豚肉、子羊、七面鳥のESBL生産者の分離/検出のために、すべての寒天とランプアッセイは、ESBLスパイク株の100%の感度と特異性を示しました。鶏のサンプルでは、ランプと発色症の両方が、MacConkey寒天と比較して、特に競合他社の細菌を追加した場合、ESBLの分離に対する感度と特異性が改善されたことを示しました。それに比べて、セフポドキシムディスク法とマイクロアレイは感度の低下を示しました。
The aim of this work was to develop a molecular method using loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for detection of extended spectrum β-lactamase (ESBL)-producing Enterobacteriaceae from meat, and to compare it with different isolation agars and microarrays. LAMP assays were developed for CTX-M groups 1, 2, and 9 and OXA-10-like genes. Chicken, lamb, beef, pork, and turkey samples were spiked with 10, 100, and 1,000 cfu/gram using 8 strains of ESBL-producing Enterobacteriaceae (CTX-M sequence types 1, 2, 3, 14, 15, OXA-11, SHV-2, TEM-52) +/- a mix of competitor organisms. Samples were enriched overnight in buffered peptone water (BPW) +/- antibacterials before plating to CHROMagar CTX, OXOID ESBL Brilliance agar, and MacConkey agar with 1 mg/L cefotaxime. Selected BPW broths were also tested using LAMP assays, microarrays and using cefpodoxime discs on agar. For isolation/detection of ESBL producers from beef, pork, lamb, and turkey spiked with 10 or 100 cfu/gram ESBL (natural flora only), all agars and the LAMP assays showed 100% sensitivity and specificity for ESBL spike strains. For chicken samples, both LAMP and chromogenic agars showed improved sensitivity and specificity for isolation of ESBLs compared with MacConkey agar, particularly with competitor bacteria added. In comparison, the cefpodoxime disc method and microarray showed reduced sensitivity.
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