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マイクロRNA（miRNA）は、肝星細胞（HSC）の重要なメディエーターとして浮上しており、肝線維症の病因において極めて重要です。RNA干渉（RNAI）経路の重要な酵素であるダイサーは、前駆体miRNAを機能的に成熟させた形態に合わせて切断することに関与しています。新たな証拠は、胚発生と腫瘍でダイサーの発現が調節不全になっていることを実証しています。本研究では、ダイサーの発現がHSCの活性と相関しているかどうかに対処することを目的としました。組換えレンチウイルスを使用して、ダイカーを標的とする短いヘアピンRNA（shRNA）を生成しました。DicerのmRNAおよびタンパク質発現は、3組のDicer shrNAベクターによって効果的に阻害され、そのうちShRNA1ベクターは最も強力な阻害効果を示しました。SHRNA1ベクターは、HSCの活性に対する顕著な阻害効果を示し、細胞増殖の減少と、型コラーゲン（Col1a1）、α-スムース筋アクチン（α-SMA）、組織などの線維症関連遺伝子の減少をもたらします。メタロプロテイナーゼ（TIMP）の阻害剤。Col1a1、α-SMAおよびTIMPのmRNA発現は、それぞれ60、56、49％減少しました。タンパク質の発現は、それぞれ56、52、42％減少しました。さらに、Dicerの阻害により、miR -138、-143、-140、および-122レベルが減少し、そのうちmiR -138が最も強い減少を示しました。ホタルルシフェラーゼレポーターの実験とRT-PCRは、ホスファターゼと張力ホモログが染色体10（PTEN）、RAS GTPase活性化様タンパク質1（RASAL1）、アシルCoAシンテターゼ長鎖ファミリーメンバー1（ACSL1）およびP27 3で削除されたことを示しました。「翻訳されていない領域配列は、それぞれmiR -138、-143、-140、および-122によって標的にされました。まとめると、本研究は、in vivoでの肝線維症のRNAi研究の基礎として役立つ可能性のあるHSCのコラーゲン合成におけるダイサー媒介miRNA処理の役割の重要な新しい発見に貢献しています。
マイクロRNA（miRNA）は、肝星細胞（HSC）の重要なメディエーターとして浮上しており、肝線維症の病因において極めて重要です。RNA干渉（RNAI）経路の重要な酵素であるダイサーは、前駆体miRNAを機能的に成熟させた形態に合わせて切断することに関与しています。新たな証拠は、胚発生と腫瘍でダイサーの発現が調節不全になっていることを実証しています。本研究では、ダイサーの発現がHSCの活性と相関しているかどうかに対処することを目的としました。組換えレンチウイルスを使用して、ダイカーを標的とする短いヘアピンRNA（shRNA）を生成しました。DicerのmRNAおよびタンパク質発現は、3組のDicer shrNAベクターによって効果的に阻害され、そのうちShRNA1ベクターは最も強力な阻害効果を示しました。SHRNA1ベクターは、HSCの活性に対する顕著な阻害効果を示し、細胞増殖の減少と、型コラーゲン（Col1a1）、α-スムース筋アクチン（α-SMA）、組織などの線維症関連遺伝子の減少をもたらします。メタロプロテイナーゼ（TIMP）の阻害剤。Col1a1、α-SMAおよびTIMPのmRNA発現は、それぞれ60、56、49％減少しました。タンパク質の発現は、それぞれ56、52、42％減少しました。さらに、Dicerの阻害により、miR -138、-143、-140、および-122レベルが減少し、そのうちmiR -138が最も強い減少を示しました。ホタルルシフェラーゼレポーターの実験とRT-PCRは、ホスファターゼと張力ホモログが染色体10（PTEN）、RAS GTPase活性化様タンパク質1（RASAL1）、アシルCoAシンテターゼ長鎖ファミリーメンバー1（ACSL1）およびP27 3で削除されたことを示しました。「翻訳されていない領域配列は、それぞれmiR -138、-143、-140、および-122によって標的にされました。まとめると、本研究は、in vivoでの肝線維症のRNAi研究の基礎として役立つ可能性のあるHSCのコラーゲン合成におけるダイサー媒介miRNA処理の役割の重要な新しい発見に貢献しています。
MicroRNAs (miRNAs) have emerged as important mediators of hepatic stellate cells (HSCs) and are pivotal in the pathogenesis of liver fibrosis. Dicer, the key enzyme in the RNA interference (RNAi) pathway, is involved in cutting precursor miRNAs to functionally mature forms. Emerging evidence has demonstrated that Dicer expression is dysregulated in embryo development and tumors. In the present study, we aimed to address whether Dicer expression was correlated with the activity of HSCs. We used a recombinant lentivirus to generate short hairpin RNAs (shRNAs) targeting Dicer. The mRNA and protein expression of Dicer was effectively inhibited by three pairs of Dicer shRNA vectors, of which the shRNA1 vector exhibited the strongest inhibitory effect. The shRNA1 vector demonstrated a marked inhibitory effect on the activity of HSCs, resulting in the reduction of cell proliferation and the decrease of fibrosis-related genes, including type Ⅰ collagen (Col1A1), α-smooth muscle actin (α-SMA) and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP). The mRNA expression of Col1A1, α-SMA and TIMP were decreased by 60, 56 and 49%, respectively. The protein expression was reduced by 56, 52 and 42%, respectively. Additionally, the inhibition of Dicer resulted in a decrease of miR-138, -143, -140 and -122 levels, of which miR-138 exhibited the strongest decline. The firefly luciferase reporter experiments and RT-PCR indicated that phosphatase and tension homolog deleted on chromosome 10 (PTEN), Ras GTPase activating-like protein 1 (RASAL1), acyl-CoA synthetase long-chain family member 1 (ACSL1) and p27 3' untranslated region sequences were targeted by miR-138, -143, -140 and -122, respectively. Taken together, the present study contributes important new findings for the role of Dicer-mediated miRNA processing in collagen synthesis of HSCs, which may serve as a foundation for RNAi study of liver fibrosis in vivo.
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