ヒトヘルペスウイルス6型活性感染を調査するためのリアルタイムPCRによる2つのウイルス転写産物の定量化

背景：ヒトヘルペスウイルス6（HHV-6）はエクサン性亜活力を引き起こし、特に造血幹細胞移植後の免疫不全患者の症候性反応に関連しています。ウイルスmRNAの検出は、潜在、染色体統合、真の複製ウイルスの違いを生むのに役立ちます。また、異なる細胞タイプのウイルス増殖を調査するための便利なツールでもあります。 目的：臨床環境で使用できる検出と定量化HHV-6転写産物の分子ツールを開発する。 研究デザイン：2つの1段階の逆トランスクリプティクリックゼーゼ定量的リアルタイムPCR（RT-QPCR）が、すぐに初期のU90および後期U100 mRNAの定量化のために開発されました。ウイルスmRNA負荷は、in vitroでの感染中のウイルスDNA負荷と、幹細胞移植患者から収集された血液サンプルと比較されました。 結果：2つの定量的リアルタイムPCRの分析性能が良好でした。in vitroでは、両方の転写産物の速度論がDNAレベルとよく相関していました。活性HHV-6感染症の患者からの60の血液サンプルが分析されました。HHV-6 DNA、U90 RNA、U100 RNAの質的結果の全体的な一致は良好でした。HHV-6 DNA負荷は、mRNA負荷よりも有意に高かった。臨床サンプルでは、​​U100およびU90 mRNAの量は低く、その検出は主に1000コピー/mlの血液より上のウイルスDNA負荷に関連していました。 結論：新しいアッセイは、in vitroおよびin vivoでのウイルス転写のモニタリングのための敏感で信頼できる方法です。それらの検出はin vivoでの高いDNA負荷に関連しているため、活性感染症の診断に役立つツールになる可能性があります。

BACKGROUND: Human herpesvirus 6 (HHV-6) causes exanthema subitum and is associated with symptomatic reactivations in immunocompromised patients, particularly after hematopoietic stem cell transplantation. The detection of viral mRNA can help to make the difference between latent, chromosomally integrated and true replicating virus. It can also be a useful tool to investigate viral multiplication in different cell types. OBJECTIVES: To develop molecular tools for the detection and quantification HHV-6 transcripts that can be used in a clinical setting. STUDY-DESIGN: Two one-step reverse-transcriptase quantitative real-time PCR (RT-qPCR) were developed for the quantification of the immediate early U90 and the late U100 mRNAs. Viral mRNA loads were compared to viral DNA loads during infection in vitro and in blood samples collected from stem cell transplanted patients. RESULTS: Analytical performances of the two quantitative real-time PCR were good. In vitro, kinetics of both transcripts was well correlated with DNA levels. Sixty blood samples from patients with active HHV-6 infection were analyzed. Overall agreement of qualitative results for HHV-6 DNA, U90 RNA and U100 RNA was good. HHV-6 DNA loads were significantly higher than mRNA loads. In clinical samples, the amounts of U100 and U90 mRNAs were low and their detection was mainly associated to viral DNA loads upper than 1000 copies/ml of blood. CONCLUSION: The new assays are sensitive and reliable methods for the monitoring of viral transcription in vitro and in vivo. As their detection is associated to high DNA loads in vivo, they can be helpful tools for the diagnosis of active infection.