核酸の細胞化学におけるピロニンY（g）の適用

中国のハムスター卵巣（CHO）細胞または単離された核をピロニンY（PY）で染色し、吸収または蛍光顕微鏡で分析し、フローサイトメトリーによって分析しました。染色反応の特異性は、染色可能な材料のRNaseまたはDNaseに対する感度をテストすることによりアッセイされました。Pyで染色された固定細胞の光吸収によって検出された色の複合体は、非蛍光であり、Pyによる一本鎖（SS）RNAの凝縮の産物である可能性が最も高い。ポリ（RA）とポリ（RA、RG）は、凝縮に最も敏感です。二本鎖（DS）核酸とのPy相互作用の産物は蛍光であり、細胞内で細胞で検出できます。単独で使用されたPyはDNAとRNAの両方を染色し、これらの核酸の染色能力は平衡時のPy濃度によって異なります。330 microMを超える濃度では、おそらく染料によって引き起こされる変性と凝縮のために、RNAの染色性が低下します。Hoechst 33342の存在下では、Pyは固定細胞または単離された細胞核でRNAを特異的に染色できます。DS RNAを持つPyの複合体のみが蛍光であるため、この色素はRNA立体構造のプローブとして使用できます。有糸分裂細胞のRNAの染色性は、G2相の細胞のRNA染色性よりも約25％低いため、有糸分裂中に細胞RNAがDS立体化されていることが比例して少ないことが示されています。Hoechst 33342とPyの使用に基づいたDNA/RNA検出の2つの細胞化学的方法の利点と制限、およびもう1つはアクリジンオレンジのメタクロマティック特性を使用することを比較します。

Chinese hamster ovary (CHO) cells or isolated nuclei were stained with pyronin Y(PY) and analyzed by absorption or fluorescence microscopy, as well as by flow cytometry. Specificity of the staining reaction was assayed by testing sensitivity of the stainable material to RNase or DNase. The colored complexes detected by light absorption in fixed cells stained with PY are nonfluorescent and are most likely the products of condensation of single-stranded (ss) RNA by PY; the poly(rA) and poly(rA,rG) are the most sensitive to condensation. The products of PY interaction with double-stranded (ds) nucleic acids are fluorescent and can be detected in cells by cytofluorometry. PY used alone stains both DNA and RNA, and the staining capabilities of these nucleic acids vary depending upon the PY concentration at equilibrium; at a concentration above 330 microM, the RNA stainability decreases, perhaps due to its denaturation and condensation caused by the dye. In the presence of Hoechst 33342, PY can specifically stain RNA in fixed cells or isolated cell nuclei. Because only complexes of PY with ds RNA are fluorescent, this dye can be used as a probe of RNA conformation, e.g., to monitor denaturation of RNA in situ. The RNA stainability of mitotic cells is about 25% lower than that of cells in G2 phase, which indicates that during mitosis proportionately less cellular RNA is in the ds conformation. The advantages and limitations of the two cytochemical methods for DNA/RNA detection, one based on the use of Hoechst 33342 and PY, and another employing the metachromatic properties of acridine orange, are compared.