チロシンリン酸化により、IKKβによる複数のシグナル伝達入力の統合が可能になります

NFκBおよび関連する転写因子によって調節されるシグナル伝達は、多くの炎症性および自己免疫疾患、癌、およびストレス反応にとって中心的に重要です。カノニカルNFκB転写経路を直接調節するキナーゼ、κBキナーゼβ（IKKβ）の阻害剤は、炎症シグナルに応答してNIKまたはTAK1によって媒介されるSerリン酸化によって活性化を受けます。二酸化チタンベースのホスホペプチド濃縮（TIO2） - 液体クロマトグラフィー（LC） - 高質量精度タンデム質量分析（MS/MS）を使用して、IKKβおよびFGFR2を発現するヒトHEK293細胞のIKKβリン酸化を分析しました。がん。IKKβの異常に高いカバーを達成し、活性化ループ内のTyr169でのTyrリン酸化の豊富な部位を特定しました。この部位のホスホミミックは、象徴的な変異体S177E/S181Eを超えるキナーゼ活性化とNFκB核局在のレベルを付与し、IKKβのRTKを介したTyrリン酸化がNFκB転写活性化を直接調節する可能性があることを示しています。

Signaling regulated by NFκB and related transcription factors is centrally important to many inflammatory and autoimmune diseases, cancer, and stress responses. The kinase that directly regulates the canonical NFκB transcriptional pathway, Inhibitor of κB kinase β (IKKβ), undergoes activation by Ser phosphorylation mediated by NIK or TAK1 in response to inflammatory signals. Using titanium dioxide-based phosphopeptide enrichment (TiO2)-liquid chromatography (LC)-high mass accuracy tandem mass spectrometry (MS/MS), we analyzed IKKβ phosphorylation in human HEK293 cells expressing IKKβ and FGFR2, a Receptor tyrosine kinase (RTK) essential for embryonic differentiation and dysregulated in several cancers. We attained unusually high coverage of IKKβ, identifying an abundant site of Tyr phosphorylation at Tyr169 within the Activation Loop. The phosphomimic at this site confers a level of kinase activation and NFκB nuclear localization exceeding the iconic mutant S177E/S181E, demonstrating that RTK-mediated Tyr phosphorylation of IKKβ has the potential to directly regulate NFκB transcriptional activation.